- Nghiên cứu một số các biểu hiện triệu chứng lâm sàng của lợn nghi mắc
4.4. SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP HOÁ MÔ MIỄN DỊCH đỂ CHẨN đOÁN HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP Ở LỢN
HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP Ở LỢN
Chúng tôi tiến hành nhuộm hóa mô miễn dịch ở các cơ quan: phổi, hạch phổi, lách, gan, thận, ruột, tim của tất cả các nhóm lợn, tử cung ựối với nhóm nái mang thai và nái nuôi con. Do ựiều kiện có hạn về thời gian cũng như kinh phắ tiến hành nên mỗi nhóm lợn chúng tôi chỉ chọn ra 2 cá thể, mỗi cơ quan chúng tôi lấy 2 tiêu bản ựể tiến hành nhuộm hóa mô miễn dịch. Ngoài các mẫu nghi này chúng tôi cũng lấy mỗi một cơ quan tổ chức tương ứng 2 tiêu bản của lợn âm tắnh (ựược xác ựịnh qua phản ứng RT- PCR) với PRRS ựể làm ựối chứng âm.
Kết quả nhuộm hóa mô miễn dịch ựược chúng tôi thể hiện trong bảng 4.5. Theo Boenisch (2001), khi có mặt của virus trong tổ chức ựem làm hóa miễn dịch sẽ cho kết quả dương tắnh với sự xuất hiện màu nâu vàng trên lát cắt tổ chức (màu của DAB). Như vậy, dựa vào sự xuất hiện màu nâu vàng của tiêu bản chúng tôi có thể ựánh giá ựược vị trắ virus cư trú và mật ựộ virus phân bố tại ựó.
Quan sát trên tiêu bản nhuộm IHC chúng tôi thấy có sự phân bố virus ở các cơ quan như sau:
-Phổi: Virus tấn công các ựại thực bào phế nang
-Hạch : Virus tấn công các ựại thực bào nằm trong hạch Lâm ba. -Lách: Virus phân bố rải rác
-Gan: Virus cư trú và nhân lên trong các tế bào Kupfer. -Ruột: PRRSV nằm trong tế bào thực bào của ruột.
- Tại thận, virus nằm trong cầu thận. Do virus tấn công làm cho cầu thận bị viêm, xoang Baoman giãn rộng.
- Ở tim: Virus nằm trong các tế bào cơ tim.
- Tử cung: Có hiện tượng viêm loét nội mạc, cơ và tương mạc tử cung nên virus nằm trong các tế bào ựại thực bào có mặt tại tử cung.
Tóm lại virus tấn công vào các tế bào thực bào tại các cơ quan gây suy giảm miễn dịch và mở ựường cho virus và vi khuẩn khác tấn công làm cho triệu chứng, bệnh tắch của lợn thêm trầm trọng.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ.. 53
Bảng 4.5. Kết quả nhuộm hoá mô miễn dịch của lợn mắc PRRS
Lợn con theo mẹ Lợn sau cai sữa Lợn nái mang thai Lợn nái nuôi con
Lợn 1 Lợn 2 Lợn 1 Lợn 2 Lợn 1 Lợn 2 Lợn 1 Lợn 2 đối chứng âm Nhóm lợn Cơ quan Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Tiêu bản 1 Tiêu bản 2 Phổi +++ +++ ++ ++ +++ +++ +++ +++ ++ ++ +++ +++ +++ +++ ++ ++ - - Hạch phổi +++ +++ ++ ++ +++ +++ +++ +++ ++ ++ ++ +++ ++ +++ ++ ++ - - Lách ++ ++ + + + + + + + + ++ ++ ++ ++ + + - - Gan ++ + + + + + + + - + ++ ++ ++ ++ - + - - Thận + ++ + + + + - + + + ++ ++ ++ ++ + + - - Ruột ++ ++ + + - + + + + + + + + + + + - - Tim + + - - + + + + + + + + + + + + - - Tử cung ++ ++ + + ++ ++ ++ ++ - -
Ghi chú: +++ đám, hạt bắt màu nâu vàng nhiều ++ đám, hạt bắt màu nâu vàng trung bình + đám, hạt bắt màu nâu vàng ắt - Không có ựám, hạt bắt màu nâu vàng
Qua bảng 4.5 ta thấy các tiêu bản khác nhau cho kết quả không giống nhau. Tùy thời gian virus xâm nhập vào cơ thể lợn và diễn biến của bệnh mà lượng virus cư trú tại các cơ quan khác nhau. Nhìn chung phổi và hạch Lâm ba phổi là hai cơ quan có số lượng virus tồn tại nhiều nhất vì vậy các tiêu bản có nhiều vị trắ bắt màu nhiều nhất. điều này có thể giải thắch là do PRRSV thắch ứng nhất với các ựại thực bào phế nang nên sau khi xâm nhập vào cơ thể nó ựến tấn công ựầu tiên vào các ựại thực bào này sau ựó mới tấn công ựến các ựại thực bào ở các cơ quan khác.
đa số các kết quả IHC ở tiêu bản 1, 2 của cùng một con lợn là giống nhau. Ngoài ra chúng tôi còn quan sát thấy sự khác biệt về kết quả nhuộm màu IHC ở trên cùng một cơ quan nhưng tại hai vị trắ khác nhau. Ở lợn con theo mẹ 1, tiêu bản gan 1 có IHC (++), tiêu bản 2 có IHC (+). Còn trên tổ chức thận, tiêu bản 1 có IHC (+) tiêu bản tiêu bản 2 có IHC (++). Ở lợn nuôi thịt, trên tổ chức ruột, tiêu bản 1(-), tiêu bản tiêu bản 2 (+). Ở lợn giai ựoạn vỗ béo 2, trên tổ chức gan, tiêu bản 1 có IHC (-), tiêu bản 2 có IHC (+). điều này cho thấy virus tồn tại với số lượng khác nhau ở từng vùng. Nếu theo dõi ựược từng thời ựiểm virus tấn công vào các cơ quan thì ta có thể ựưa ra ựược cơ chế sinh bệnh cụ thể của PRRSV.
Kết quả IHC của lợn 1 và 2 trong cùng một nhóm lợn có sự khác nhau do mức ựộ biểu hiện bệnh của các con lợn này không ựồng ựều. điều này có thể giải thắch là do các cá thể có sức ựề kháng với bệnh và ựiều kiện ngoại cảnh khác nhau cho nên mức ựộ trầm trọng của bệnh là khác nhau. Mặt khác, do các con lợn này ựược chúng tôi lấy ở các nơi khác nhau nên có chế ựộ chăm sóc nuôi dưỡng, vệ sinh chuồng trại, khả năng và ựiều kiện tiếp xúc với mầm bệnh của lợn không giống nhau. Mức ựộ biểu hiện bệnh nặng hay nhẹ còn phụ thuộc vào số lượng, ựộc lực của các chủng virus , ựường xâm nhập và thời gian virus xâm nhập vào cơ thể lợn,Ầ
Các tiêu bản của lợn ựối chứng âm không cho kết quả IHC dương tắnh.
Tất cả những kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với kết quả nghiên cứu của Pol và cs (1991); Hennings và cs (1996).
Qua kết quả trên chúng tôi có nhận xét: tất cả các tiêu bản mà chúng tôi nhuộm ựều cho kết quả dương tắnh rõ, có nhiều ựám bắt màu nâu vàng. Kết quả nhuộm hóa mô miễn dịch cho kết quả dương tắnh nhiều nhất với các cơ quan là phổi và hạch Lâm ba; các tiêu bản của các cơ quan khác như lách, gan, thận, ruột, tử cung... cũng cho kết quả dương tắnh nhưng số lượng các ựám bắt màu nâu vàng không nhiều bằng tại phổi và hạch phổi. Kết quả nhuộm IHC còn cho thấy tử cung cho kết quả dương tắnh trong tất cả các tiêu bản nhuộm của chúng tôi, vì vậy, tử cung cũng là cơ quan có giá trị chẩn ựoán tốt trong nghiên cứu về PRRSV. Như vậy, bước ựầu sử dụng kỹ thuật hóa mô miễn dịch với kháng thể PRRS và chất nhuộm màu DAB trong chẩn ựoán PRRS ựã cho kết quả chắnh xác.
