4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất ñ iều tiết sinh trưởng ñế n kh ả năng tái sinh chồi in vitro từ chồi ñỉnh của cây ớt ngọt
4.1.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng ñộ BA ñến khả năng nhân nhanh cây
ớt ngọt từ chồi ñỉnh
ðể nghiên cứu ảnh hưởng của BA ñến khả năng tái sinh chồi từ chồi
ñỉnh của cây ớt ngọt chúng tôi tiến hành bố trí thí nghiệm với các nồng ñộ 0; 1; 3; 5; 7 mg/l BA bổ sung trong môi trường nuôi cấy với mẫu cấy ñược chuẩn bị như mô tả trong phần phương pháp lấy mẫu. Kết quả thu ñược sau 6 tuần nuôi cấy:
Bảng 4.1. Ảnh hưởng của nồng ñộ BA ñến khả năng nhân nhanh cây ớt ngọt từ chồi ñỉnh
Chỉ tiêu theo dõi Công thức Chiều cao chồi
(cm) Hệ số nhân (chồi/mẫu) Chất lượng chồi Công thức 1: ðối chứng (MS) 4,7 1,0 + Công thức 2: MS + 1BA (mg/l) 2,1 3,2 + + Công thức 3: MS + 3BA (mg/l) 3,4 3,3 + + + Công thức 4: MS + 5BA (mg/l) 3,7 3,6 + + + + Công thức 5: MS + 7BA (mg/l) 3,4 3,1 + + + + CV% 3,0 3,9 LSD (0,05) 0,2 0,2 * Ghi chú:
(+): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển tốt lá xanh non, chồi hơi mảnh và chủ
yếu phát triển chiều cao.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 38
Mẫu cấy có hiện tượng sùi callus mạnh ở phần tiếp xúc với môi trường, có
mẫu bị sùi callus ñến ngọn và có màu vàng nhạt.
(+++): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển chậm, không phát triển về chiều
cao, bắt ñầu có hiện tượng bật chồi nhưng phần mẫu tiếp xúc với môi trường
vẫn xuất hiện callus tuy nhiên có ít hơn so với (++) và có màu hơi vàng.
(++++): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển chậm và không phát triển về
chiều cao. Mẫu vẫn có màu hơi vàng tuy nhiên ở môi trường này mẫu cấy không xuất hiện callus, và khả năng bật chồi tốt hơn so với (+++).
Kết quả bảng 4.1 cho thấy:
BA không có tác dụng rõ rệt trong việc tạo chồi ớt ngọt trong nuôi cấy in vitro. Trong các công thức có bổ sung BA (1- 3 mg/l) thì mẫu cấy sinh trưởng phát triển chậm không phát triển chiều cao. Mẫu cấy có hiện tượng sùi callus mạnh ở phần tiếp xúc với môi trường, có mẫu bị sùi callus ñến ngọn. Mẫu có màu vàng, không nhân ñược chồi chất lượng, mẫu cấy xấu không thích hợp cho việc nhân chồi, hệ số nhân chồi chỉ ñạt là 3,2 - 3,3 chồi/mẫu. Trong công thức 4 có bổ sung 5 mg/l BA mẫu cấy vẫn sinh trưởng phát triển chậm, không phát triển về chiều cao, bắt ñầu có hiện tượng bật chồi và hệ số
nhân ở công thức này ñạt (3,6 chồi/mẫu). Ở công thức 5 mẫu cấy vẫn không phát triển về chiều cao, có màu hơi vàng và hệ số nhân chồi thấp ñạt (3,1 chồi/mẫu) thấp hơn so với môi trường có bổ sung 5 mg/l. Trong khi ñó ở môi trường không bổ sung BA thì mẫu cấy sinh trưởng phát triển tốt lá xanh non, chồi hơi mảnh nhưng chủ yếu phát triển chiều cao không ñạt ñược mục ñích của thí nghiệm nhân chồi.
Kết luận: Môi trường có hiệu quả hơn cho tái sinh chồi là môi trường MS + 5 mg/l BA cho hệ số nhân chồi ñạt 3,6 chồi/mẫu. Kết quả này của chúng tôi cũng hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu của các tác giả
Keithellakpam Saneatombi (2005) ñã sử dụng BA ở nồng ñộ 4,5 và 9mg/l nhưng cũng không cho kết quả tốt.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 39
4.1.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp BA kết hợp với IAA ñến khả năng
nhân nhanh cây ớt ngọt từ chồi ñỉnh
Trong một số thí nghiệm nghiên cứu về cây ớt ngọt các tác giả thấy rằng việc tổ hợp của BA và IAA có hiệu quả tốt hơn so với chỉ sử dụng BA ñơn lẻ
(S.Arous, et al, 2001) [71] trong việc cải thiện số chồi và chất lượng chồi. Do ñó chúng tôi tiến hành thí nghiệm sử dụng môi trường MS + 5 mg/l BA làm cơ bản kết hợp với IAA ở các nồng ñộ (0,5; 1,0; 1,5;2,0 mg/l).
Thí nghiệm sau 6 tuần theo dõi thu ñược kết quả như sau:
Bảng 4.2. Ảnh hưởng của tổ hợp BA kết hợp với IAA ñến khả năng nhân nhanh của cây ớt ngọt từ chồi ñỉnh
CT Chiều cao chồi (cm) Hệ số nhân (chồi/mẫu) Chất lượng chồi CT 1: ðối chứng (MS) 4,7 1,0 + CT 2: MS + 0,5 mg/l IAA + 5,0 mg/l BA 2,6 3,2 + + CT 3: MS + 1,0 mg/l IAA + 5,0 mg/l BA 2,7 4,0 + + CT 4: MS + 1,5 mg/l IAA + 5,0 mg/l BA 2,6 4,3 + + CT 5: MS + 2,0 mg/l IAA + 5,0 mg/l BA 2,6 3,4 + + CV % 3,6 2,8 LSD (0,05) 0,2 0,2 *Ghi chú:
(+): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển tốt lá xanh non, chồi hơi mảnh.
(++): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển chậm không phát triển chiều cao,,
chất lượng chồi trung bình.
Các quan sát trong quá trình làm thí nghiệm, kết quả thu ñược ở bảng 4.2 cho thấy: Các công thức khác nhau có ảnh hưởng khác nhau ñến hệ số
nhân chồi. Trong môi trường MS + 5 mg/l BA + IAA (các nồng ñộ 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg/l) cho hệ số nhân chồi tăng cao hơn so với chỉ sử dụng môi trường
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 40 có BA riêng rẽ. Ở công thức 2 khi bổ sung thêm 0,5 mg/l IAA số chồi thu
ñược trung bình trên 1 mẫu ñạt 3,2 chồi/mẫu. Khi tăng nồng ñộ IAA lên 1,0 - 1,5 mg/l thì số chồi thu ñược cũng tăng lên và ñạt từ 4,0 - 4,3 chồi/mẫu, ñạt cao nhất ở công thức 4 có bổ sung 5 mg/l BA + 1,5 mg/l IAA. Tuy nhiên trong các môi trường này chiều cao chồi bị giảm so với môi trường MS.
CT 4 CT 5
Hình 4.1 Ảnh hưởng của BA + IAA ñến số chồi/mẫu
Kết luận: Môi trường MS + 5mg/l BA +1,5mg/l IAA là môi trường cho hệ số nhân ñạt cao nhất 4,3 chồi/mẫu, ñồng thời chất lượng chồi và hệ số nhân chồi cũng ñược cải thiện hơn so với môi trường chỉ có MS + 5 mg/l BA là môi trường tốt nhất của thí nghiệm trước ñó.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 41
4.1.1.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của IAA ñến khả năng tạo rễ cho chồi
ðể xác ñịnh môi trường ra rễ thích hợp cho cây ớt ngọt, chúng tôi tiến hành thí nghiệm với việc bổ sung IAA ở các nồng ñộ 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg/l vào môi trường nuôi cấy cơ bản MS.
Sau 4 tuần nuôi cấy, chúng tôi thu ñược kết quả như sau:
Bảng 4.3. Ảnh hưởng của IAA ñến tỷ lệ ra rễ của ớt ngọt
Tỷ lệ ra rễ (%) (Ngày sau cấy) Công thức thí nghiệm 5 10 15 20 Chất lượng rễ Công thức 1: ð/C - MS 0,0 41,67 75,00 100 + Công thức 2: MS + 0,5 mg/l IAA 0,0 58,33 86,11 100 + + Công thức 3: MS + 1,0 mg/l IAA 22,2 69,44 100 100 + + + + Công thức 4: MS + 1,5 mg/l IAA 0,0 52,78 77,78 100 + + + + Công thức 5: MS + 2,0 mg/l IAA 0,0 47,22 70,00 100 + + + +
Bảng 4.4. Ảnh hưởng của IAA ñến số rễ, chiều cao và số lá của chồi
Chỉ tiêu theo dõi Công thức thí nghiệm Chiều cao
chồi (cm) Số lá (lá/chồi) Số rễ (rễ/chồi) Chất lượng rễ Công thức 1: ð/C - MS 4,65 4,89 6,72 + Công thức 2: MS + 0,5 mg/l IAA 6,16 6,72 16,55 + + Công thức 3: MS + 1,0 mg/l IAA 5,44 5,53 18,03 + + + Công thức 4: MS + 1,5 mg/l IAA 4,86 5,58 17,00 + + + + Công thức 5: MS + 2,0 mg/l IAA 4,73 5,00 16,17 + + + + CV % 4,30 1,70 LSD (0,05) 0,43 0,47 * Ghi chú:
(+): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển tốt lá xanh non, chồi hơi mảnh, chất lượng chồi tốt số lượng rễ ít, rễ dài và mảnh.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 42
(+ +): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển tốt lá xanh non, chồi mập hơn so
với môi trường MS. Số lượng rễ nhiều, rễ to, mập và nhiều lông hút.
(+++): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển tốt lá xanh non, chồi mập, chất
lượng chồi tốt. Số lượng rễ rất nhiều, rễ to, mập và nhiều lông hút. Nhưng cây
chủ yếu nuôi rễ nên chiều cao giảm hơn so với (+ +).
(++++): Mẫu cấy sinh trưởng phát triển chậm hơn lá xanh ñậm, chồi mập nhưng chiều cao bị giảm, chất lượng chồi trung bình. Số lượng rễ rất
nhiều dày ñặc, rễ to, mập và nhiều lông hút
Số liệu bảng 4.3 và 4.4 cho thấy: Khi bổ sung IAA ở các nồng ñộ khác nhau có ảnh hưởng khác nhau ñến sự ra rễ của chồi. Tốc ñộ ra rễ cũng như số
rễ/chồi phụ thuộc chặt chẽ vào nồng ñộ IAA bổ sung vào môi trường nuôi cấy.
Ở các công thức có bổ sung IAA, thời gian bắt ñầu ra rễ ñược rút ngắn ñáng kể, ở công thức 3 (1 mg/l IAA) rễ xuất hiện sớm nhất chỉ sau 5 ngày cấy chuyển ñã ñạt 22,2% số chồi ra rễ và chỉ sau 15 ngày cấy thì tỷ lệ ra rễ của chồi ñạt 100% với số lượng rễ nhiều, to mập và rất nhiều lông hút. Còn ở các công thức khác muộn hơn 5 ngày (cho dù nồng ñộ IAA có tăng hơn).
Về chiều cao và chất lượng của cây, ở công thức ñối chứng chồi vẫn sinh trưởng phát triển tốt chiều cao trung bình ñạt 4,65cm, tuy nhiên chồi hơi mảnh số lượng rễ ít ñạt 6,5 rễ/chồi. Trong khi ñó ở các công thức có IAA chất lượng chồi ñược cải thiện rõ rệt cả về chiều cao và số rễ/chồi. Công thức 2 và 3 cho chất lượng chồi tốt nhất, chiều cao cây ñạt từ 5,44 ñến 6,16cm; số
rễ/chồi ñạt 16,03 - 17,53 rễ. Khi nồng ñộ IAA tăng (từ 1,5 ñến 2mg/l) thì chất lượng chồi lại có xu hướng giảm.
Kết luận: Nồng ñộ IAA sử dụng có ảnh hưởng rõ rệt ñến số rễ trung bình/chồi. Trên các môi trường có IAA số rễ trung bình trên cây ñạt 16,06 ñến 17,53 sau 4 tuần nuôi cấy tùy thuộc vào nồng ñộ IAA. Ở công thức ñối chứng không bổ sung IAA số rễ chỉñạt 6,50 rễ/chồi. Nồng ñộ bổ sung IAA hiệu quả
nhất là 1,0 mg/l IAA với số rễ trung bình ñạt 16,53 rễ /chồi với chất lượng rễ
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 43
4.1.1.4 Nghiên cứu ảnh hưởng của IAA kết hợp với nồng ñộ than hoạt tính
ñến khả năng ra rễ của chồi ớt ngọt
ðể cải thiện chất lượng bộ rễ của ớt ngọt trong môi trường nuôi cấy mô ngoài nồng ñộ IAA ra chúng tôi bổ sung thêm các nồng ñộ than hoạt tính (0,1;0,5;1,0 gam), vào môi trường nuôi cấy sau 4 tuần nuôi cấy, kết quảñược thể hiện ở bảng 4.5
Bảng 4.5. Ảnh hưởng của nồng ñộ than hoạt tính kết hợp với nồng ñộ IAA ñến khả năng ra rễ của chồi ớt ngọt
Tỷ lệ ra rễ (ngày sau cấy) Công thức thí nghiệm 3 5 10 Số rễ/cây (rễ) Chiều dài rễ (cm) Chất lượng rễ ðối chứng – MS 0,00 0,00 41,67 6,72 1,20 + + MS + 1 mg/l IAA+0,1gTHT 0,00 41,67 77,78 16,56 1,17 + + MS + 1 mg/l AA+0,5gTHT 13,89 61,11 100 18,75 2,01 + + + MS + 1 mg/l + 1,0 gTHT 0,00 50,00 72,22 13,44 2,08 + + + + CV % 2,00 3,50 LSD (0,05) 0,53 0,10 Ghi chú: THT :Than hoạt tính Giải thích:
+ + Chất lượng rễ trung bình, số lượng rễ ít, hơi mảnh
+ + + Chất lượng rễ tốt, dài mập và nhiều. Cây khỏe mập lá xanh ñậm
+ + + + Chất lượng rễ tốt, chồi ngắn, thân lá phát triển bình thường
Kết quả thí nghiệm cho thấy: Tốc ñộ ra rễ khi có than hoạt tính trong môi trường diễn ra nhanh hơn, rút ngắn thời gian ra rễ. Thể hiện chỉ sau 5 ngày cấy chuyển tất cả các chồi in vitro ñã ra rễ và ñạt 100% sau 10 ngày cấy chuyển ở
nồng ñộ 1 mg/l IAA + 0,5 g than hoạt tính. Ở nồng ñộ này cũng cho số rễ nhiều nhất 18,75 rễ/cây, chất lượng rễ tốt to, mập. Trong khi ở công thức ñối chứng sau 10 ngày cấy tỷ lệ ra rễ của chồi mới ñạt 41,67%, số lượng rễ cũng ít hơn so
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 44 với môi trường có bổ sung IAA + than hoạt tính, chất lượng rễ chỉñạt trung bình, rễ hơi mảnh và ít. Tuy nhiên khi tăng nồng ñộ than hoạt từ (0,5g – 1,0g) thì sự
xuất hiện của rễ chậm lại sau 5 ngày cấy chuyển tỷ lệ ra rễ chỉñạt 50%, sau 20 ngày cấy số rễ trung bình ñạt 13,56 rễ/cây và chiều dài rễ 2,08cm/cây, chất lượng rễ tốt, to và mập.
Kết luận: ðể cải thiện chất lượng rễ của cây ớt ngọt chúng tôi ñã tiến hành bổ sung thêm vào môi trường nuôi cấy các nồng ñộ than hoạt tính khác nhau, ñã rút ngắn thời gian ra rễ của cây so với chỉ sử dụng IAA từ 5 ngày xuống còn 3 ngày sau cấy. Trong các nồng ñộ than hoạt tính ñược bổ sung ñó thì nồng ñộ 1 mg/l IAA + 0,5g than hoạt tính là thích hợp nhất với sự ra rễ
ngắn nhất sau 3 ngày cấy chuyển tỷ lệ ra rễ ñạt 13,89%, ñạt 100% chỉ sau 10 ngày cấy. Ở nồng ñộ này cũng cho số lượng rễ nhiều nhất trung bình ñạt 18,75 rễ/cây sau 20 ngày cấy, ñồng thời cho chất lượng, cũng như cây mập khỏe, lá xanh, chiều dài rễñạt 2,01cm.