3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C ỨU
3.3.1Cách bố trí thí nghiệm
* Trong nuôi cấy mô tế bào
ðể có ñược các chồi ñỉnh ớt ngọt thì chúng tôi tiến hành vào mẫu trực tiếp bằng hạt và tiến hành khử trùng hạt bằng nước Giavel 3%, trong thời gian 30 phút ñây là công thức khử trùng tốt nhất ñã ñược tìm ra ở các báo cáo trước ñó. Sau khoảng 25 – 30 ngày hạt phát triển thành cây hoàn chỉnh thì tiến hành cắt ngọn ñể tiến hành bố trí các thí nghiệm nhân cây.
Các thí nghiệm ñược bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD), 3 lần nhắc lại, mỗi lần 5 bình, mỗi bình 5 cây.
Tất cả các thí nghiệm ñều lấy ñối chứng là môi trường MS. Các thí nghiệm ñược bố trí từ tháng 7/2008 - tháng 10/2008.
* Ngoài khí canh
Các thí nghiệm ñược thiết kế theo khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh (RCB), mỗi công thức ñều ñược lặp lại 3 lần (số lượng cây ñược bố trí tùy từng thí nghiệm).
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 33 Với các thí nghiệm nhân cây bố trí 30 – 60 cây/công thức tùy từng thí nghiệm.
Với các thí nghiệm trồng cây bố trí 5 cây/m2, 3 lần lặp lại, mỗi lần 3m2 Các thí nghiệm ñược tiến hành từ tháng 9/2008 - tháng 4/2009.
* Phương pháp chuẩn bị chồi cho thí nghiệm ra rễ trong nuôi cấy mô tế bào Các chồi thu ñược sau các lần cấy chuyển, mỗi lần cấy chuyển 3 - 4 tuần, có chất lượng tốt thân mập, lá xanh tốt, có chiều dài 1,5 - 2 cm ñược cắt ngọn
ñể chuẩn bị cho thí nghiệm.
* Phương pháp ra cây ngoài vườn ươm:
Cây ớt ngọt cấy mô sau 25 ngày cấy chuyển thì tiến hành ra cây. Tiêu chuẩn cây có chiều cao từ 5 - 7cm; có từ 4 - 5 lá thật, cây khỏe mạnh, có ñầy ñủ rễ
Phương pháp ra cây. Cây từ trong bình nuôi cấy ñược lấy ra bằng panh, sau ñó dùng nước sạch ñể rửa thật sạch môi trường nuôi cấy (Agar, ñường…) bám vào rễ nhằm tránh vi khuẩn, nấm gây bệnh phát triển gây hại cho cây. Sau ñó cắm vào khay ñặt trong bồn khí canh.
Với cây trồng bằng hạt không qua cấy mô thì tiến hành gieo hạt vào lọ
thủy tinh có ñặt trong lọ một ít lấy mềm làm ẩm giấy rồi cho hạt vào ñó. Sau khoảng 25 ñến 30 ngày khi cây nảy mầm hết thì mang cây ra ngoài trồng. Tiêu chuẩn cây. Cây cao khoảng 3 - 4cm có 2 lá mầm xòe rộng, bắt ñầu có lá thật, có ñủ rễ.
Phương pháp ra cây. Dùng panh rút nhẹ nhàng cây ra khỏi lọ thủy tinh rồi rửa sạch, sau ñó cắm cây vào các khay ñặt trong bồn khí canh.
* Phương pháp cắt ngọn
Khi cây có 2 lá ñến 3 lá thật tiến hành cắt ngọn (tùy theo từng thí nghiệm). Thao tác cắt ñúng kỹ thuật, khử trùng dụng cụ trước mỗi lần cắt bằng cồn 700C và ñược hơ nóng trên ngọn lửa ñèn cồn, dụng cụ cắt là lưỡi dao lam hoặc dao cắt chuyên dụng trong nuôi cấy mô, ngọn cắt khoảng 1,7 -
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 34 2cm, có 1 lá, sau ñó cắm ngọn cắt vào các khay ñặt trong bồn khí canh.
+ Phương pháp chuẩn EC và pH của dung dịch dinh dưỡng
Với cây ra từ nuôi cấy mô và từ hạt trong ngày ñầu ra cây trồng trên khí canh thì tiến hành cho chạy nước lã ñể cây thích ứng với ñiều kiện thường. Sau ñó pha dinh dưỡng với các ngưỡng EC, pH khác nhau trên các nền dinh dưỡng (I, II, III) khác nhau. Cứ 1 ngày chuẩn EC, pH một lần.
+ Phân tích chỉ tiêu chất lượng
- ðịnh lượng vitamin C theo phương pháp chuẩn ñộ bằng Iot: Nguyên lý Vitamin C có thể khử dung dịch iot, dựa vào lượng iot bị khử bởi vitamin có trong mẫu suy ra hàm lượng vitamin C. Nguyên liệu: Cân 5 gam mẫu
- Phương pháp ño hàm lượng nitrat trong quả: Dùng máy ño chuyên dụng
Tiến hành. Cân 250 gam mẫu ñểñược khoảng 25 - 30 ml dịch, cho mẫu vào máy xay nghiền nhỏ rồi tiến hành lọc dịch trong cho vào bình ñịnh mức 25 ml, sao cho có thể ngập ñược ñầu ñiện cực khi ño dung dịch