III. VẬT LIỆU NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨ U
4.4. Kết quả nghiờn cứu trong nhà lướ i
4.4s.1.Thử phản ứng siờu nhạy trờn cõy thuốc lỏ
Thử phản ứng siờu nhạy trờn cõy thuốc lỏ một trong những phương phỏp giỳp chỳng ta xỏc ủịnh nhanh ủộc tớnh vi khuẩn gõy bệnh thối nhũn. Sau khi cỏc dũng vi khuẩn ủó ủược phõn lập và làm thuần chỳng tụi tiến hành kiểm tra ủộc tớnh của cỏc dũng vi khuẩn trờn cõy thuốc lỏ Nicotiana tabacum
bằng phản ứng siờu nhạy sau 24, 48 và 72 h tiến hành thớ nghiệm. Nếu mụ thuốc lỏ cú hiện tượng làm mất màu diệp lục, dần ngả vàng và chết hoại thỡ chứng tỏ vi khuẩn phõn lập ủược là loài ký sinh gõy bệnh vẫn cũn ủộc tớnh.
Cỏc dũng vi khuẩn ủó ủược phõn lập từ cỏc mẫu vi khuẩn gõy bệnh thối nhũn trờn hành và tỏi trờn mụi trường SPA trong 48 h. Pha dịch vi khuẩn trong nước cất vụ trựng với nồng ủộ 108 CFU/1ml. Sử dụng 0,1ml tiờm vào lớp trong của tế bào biểu bỡ (khoảng gian bào) mặt dưới phiến lỏ của cõy thuốc lỏ. Theo dừi và quan sỏt biểu hiện của phản ứng sau 24, 48 và 72 h.
Bảng 4.13: Kết quả kiểm tra phản ứng siờu nhạy của cỏc dũng vi khuẩn phõn lập trờn cõy thuốc lỏ Nicotiana tabacum
TT Cỏc mẫu phõn lập Biểu hiện phản ứng siờu nhạy 1 HT1 + 2 HT2 + 3 HT3 + 4 TT1 + 5 TT2 + 6 ðối chứng - Ghi chỳ: +: cú tạo phản ứng siờu nhạy - : khụng tạo phản ứng
ðối chứng tiờm nước ló vào mụ cõy khỏe.
HT1: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Hiệp Hũa – Kinh Mụn HT2: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Kim Xuyờn – Kim Thành HT3: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Thăng Long – Kinh Mụn TT1: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng Tỏi Cộng Hũa- Kim Thành TT2: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng Tỏi Kim Xuyờn – Kim Thành Qua bảng 4.13 kết quả trờn ta thấy 5 dũng vi khuẩn phõn lập ủem kiểm tra phản ứng siờu nhạy ủều cho phản ứng. Sau khi tiến hành tiờm cỏc dũng vi khuẩn gõy bệnh thối nhũn lờn cõy thuốc lỏ cỏc dũng vi khuẩn gõy bệnh thối nhũn ủều biểu hiện cỏc vết hoại tử sau 24 – 48 h. Và sau 3 – 4 ngày cỏc vết hoại tử này sẽ khụ và chuyển thành màu trắng xỏm. Cỏc dũng vi khuẩn dó mất
ủộc tớnh sẽ khụng tạo vết hoại tử khi tiến hành tiờm chủng kiểm tra phản ứng siờu nhạy.