III. VẬT LIỆU NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨ U
4.3.1. Kết quả phõn lập giỏm ủị nh vi khuẩn trờn mụi trường SPA
Vi khuẩn gõy bệnh thối nhũn là loại vi khuẩn cú thể tồn tại trong ủất và xõm nhiễm vào cõy qua bú mạch dẫn và phỏ hủy thành tế bào. ðể nghiờn cứu về ủặc ủiểm sinh lý, sinh húa và ủặc ủiểm sinh trưởng của vi khuẩn gõy thối nhũn chỳng tụi phõn lập và làm thuần khiết vi khuẩn trờn mụi trường nhõn tạo và nuụi cõy chỳng.
Từ cỏc isolate vi khuẩn ủó ủược phõn lập trờn cỏc cõy ký chủ nhiễm bệnh. Chỳng tụi tiến hành nuụi cấy cỏc dũng vi khuẩn thối nhũn trờn mụi trường PSA nuụi cấy ở nhiệt ủộ 280C ± 2 theo dừi ủặc ủiểm hỡnh thỏi màu sắc khuẩn lạc sau 24 – 48 giờ nuụi cấy.
Bảng 4.8. Hỡnh dạng màu sắc khuẩn lạc của cỏc isolate vi khuẩn thối nhũn trờn mụi trường SPA
Chỉ tiờu Mẫu phõn lập
Hỡnh dạng, màu sắc khuẩn lạc trờn mụi trường SPA
Nhuộm gram HT1 Khuẩn lạc trũn, nhẵn, búng, bề mặt lồi,
màu trắng kem
Âm HT2 Khuẩn lạc trũn, nhẵn, búng màu trắng sửa Âm HT3 Khuẩn lạc trũn nhẵn, búng, bề mặt lồi
màu trắng sữa
Âm TT1 Khuẩn lạc trũn, nhẵn, bong màu trắng
trong
Âm TT2 Khuẩn lạc trũn nhẵn, búng hơi khụ, mặt
lồi màu trắng sữa
Ghi chỳ:
HT1: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Hiệp Hũa – Kinh Mụn HT2: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Kim Xuyờn – Kim Thành HT3: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Thăng Long – Kinh Mụn TT1: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng tỏi Cộng Hũa- Kim Thành TT2: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng tỏi Kim xuyờn – Kim Thành Qua bảng 4.8 cỏc dũng vi khuẩn gõy bệnh thối nhũn trờn hành và tỏi
ủều phỏt triển trờn mụi trường SPA. Cỏc isolate vi khuẩn phõn lập trờn cõy trồng khỏc nhau thỡ cú màu sắc khuẩn lạc là khỏc nhau như dũng vi khuẩn phõn lập trờn cõy hành cú màu trắng kem và trắng sữa, cõy tỏi khuẩn lạc cú màu trắng trong. Trờn mụi trường SPA cỏc khuẩn lạc vi khuẩn cũn ủộc tớnh cú dạng to, trũn, lồi, nhẵn búng, cũn cỏc khuẩn lạc khỏc mất ủộc tớnh thường cú dạng nhỏ mầu hơi nõu, nhăn nheo. Vi khuẩn gõy bệnh thối nhũn trờn cõy hành và cõy tỏi ủều nhuộm Gram õm. Ngoài việc quan sỏt hỡnh dỏng của khuẩn lạc của cỏc dũng vi khuẩn, chỳng tụi cũn theo dừi sự phỏt triển ủường kớnh của khuẩn lạc của cỏc dũng vi khuẩn.
Bảng 4.9. Ảnh hưởng của mụi trường dinh dưỡng ủến sự phỏt triển của khuẩn lạc của cỏc dũng vi khuẩn phõn lập ở nhiệt ủọ 25 – 270C
ðường kớnh khuẩn lạc trờn mụi trường nuụi cấy SPA (mm) Mẫu phõn lập Sau 24 giờ nuụi cấy Sau 48 giờ nuụi cấy Sau 72 giờ nuụi cấy HT1 5,06 ± 0,2 7,66 ± 0,12 8,64 ± 0,49 HT2 5,86 ± 0,13 7,56 ± 0,067 8,65 ± 0,3 HT3 5,98 ± 0,14 8,00 ± 0,16 8,73 ± 0,3 TT1 5,46 ± 0,13 7,04 ± 0,13 8,06 ± 0,17 TT2 5,25 ± 0,11 7,30 ± 0,09 8,15 ± 0,13 Ghi chỳ :
HT1: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Hiệp Hũa – Kinh Mụn HT2: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Kim Xuyờn – Kim Thành HT3: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng hành Thăng Long – Kinh Mụn TT1: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng Tỏi Cộng Hũa- Kim Thành TT2: Mẫu phõn lập lấy từ vựng trồng Tỏi Kim xuyờn – Kim Thành Qua bảng 4.9 từ cỏc dũng vi khuẩn phõn lập ủược trờn hành và tỏi cho thấy cỏc isolate phõn lập từ hành phỏt triển mạnh hơn so với cỏc isolate phõn lập từ cõy tỏi. Khả năng sinh trưởng của cỏc dũng vi khuẩn là khỏc nhau. Khi nuụi cấy chỳng trờn mụi trường SPA sau 24 giờ mẫu HT3 cú ủường kớnh phỏt triển cao nhất 5,98 mm, mẫu TT2 cú ủường khớnh phỏt triển thấp nhất là 5,25 mm. Sau 48h mẫu HT3 cú ủường kớnh phỏt triển cao nhất 8,00 mm, mẫu TT2 cú ủường kớnh phỏt triển thấp nhất là 7,30 mm. Sau 72 giờ mẫu HT3 cú
ủường kớnh phỏt triển cao nhất 8,73 mm, mẫu TT2 cú ủường kớnh phỏt triển thấp nhất là 8,15 mm.
Theo kết quả theo dừi sự phỏt triển của vi khuẩn trờn mụi trường SPA sau 24, 48, 72 giờ chỳng tụi nhận thấy ủường kớnh của khuẩn lạc phỏt triển mạnh từ
24 ủến 48 giờ ủầu nuụi cấy, sau ủú tốc ủộ phỏt triển của ủường kớnh khuẩn lạc giảm dần từ 48 ủến 72 giờ sau khi nuụi cấy. Nguyờn nhõn là do từ 24 ủến 48 giờ
là giai ủoạn vi khuẩn phỏt triển theo cõp số nhõn, lỳc này tế bào vi khuẩn phõn chia cực nhanh, nhưng từ 48 ủến 72 giờ trở ủi do cỏc chất dinh dưỡng giảm và cú sự tớch tụ một số chất ức chế trong quỏ trỡnh sử dụng chất dinh dưỡng vi khuẩn tạo ra trong mụi trường nờn tốc ủộ phỏt triển của vi khuẩn chậm dần lại. Và sự sai khỏc của cỏc dũng vi khuẩn ủều khụng cú ý nghĩa.