2.4.3.1. Vacxin phũng bệnh Newcastle
Hiện nay cú nhiều loại vacxin ủể phũng bệnh Newcastle, cỏc vacxin này ủược chia làm 2 loại ủú là vacxin vụ hoạt và vacxin nhược ủộc.
* Vacxin nhược ủộc
Hiện nay cỏc chủng virut vacxin nhược ủộc ủược biết nhiều là cỏc chủng thuộc nhúm Lentogen như: chủng Lasota, chủng B1, chủng F (Asplin) Ầ hoặc thuộc nhúm Mesogen như: chủng Mukterwar, chủng Hertforshire (chủng H), chủng Roakin, chủng HaifaẦ.
Cỏc chủng virut vacxin khỏc nhau, cú ủộc lực khỏc nhau, quy trỡnh sản xuất vacxin khỏc nhau và phương phỏp sử dụng vacxin cũng khỏc nhau. Do
ủú chỳng cũng cho ủỏp ứng miễn dịch cũng khỏc nhau. Vỡ vậy tựy theo ủiều kiện cụ thể của từng nước, từng vựng, từng ủịa phương mà người ta sử dụng cỏc chủng virut vacxin Newcastle khỏc nhau ủể sản xuất vacxin phũng bệnh.
Căn cứ vào ủộc lực của virut, vacxin nhược ủộc ủược chia làm 2 nhúm Lentogen và Mesogen. Virut vacxin thuộc nhúm Lentogen gồm nhiều chủng như chủng B1, chủng F, chủng Lasota. Năm 1966 ở ỳc ủó phõn lập ủược 1
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 33
chủng virut Newcastle trờn ủàn gà bỡnh thường ủặt tờn là Queensland V4. Chủng này hoàn toàn khụng cú ủộc lực, khụng cú khả năng gõy bệnh cho gà nhưng vẫn giữ ủược tớnh khỏng nguyờn và gõy miễn. Vacxin Newcastle chế
từ chủng V4 cũn cú 2 ủặc tớnh ưu việt ủú là tớnh chịu nhiệt dai và ủặc tớnh thứ
2 là nú cú tỏc dụng gõy miễn dịch qua tiếp xỳc trực tiếp.
Trong cơ thể gà, virut nhúm lentogen chỉ cú khả năng nhõn lờn trong tế
bào của một số mụ nhất ủịnh như mụ ủường hụ hấp, mụ ủường tiờu húa (Rott, 1979)[82]. Vỡ vậy, khi sử dụng vacxin cho ủàn gà bằng phương phỏp nhỏ mắt, nhỏ mũi và cho uống ủều cho ủỏp ứng miễn dịch tốt.
Vacxin nhúm Lentogen khi sử dụng cú ưu ủiểm rất an toàn, cú thể dựng vacxin phũng bệnh cho gà ở mọi lứa tuổi. Tuy nhiờn, cú nhược ủiểm ủộ dài miễn dịch ngắn hơn so với vacxin nhúm mesogen.
Virut vacxin nhúm mesogen, ủược làm giảm ủộc khi tiờm truyền liờn tục nhiều ủời trờn phụi hay cơ thể ủộng vật. đại diện nhúm vacxin này là cỏc chủng Mukteswar, ủược làm giảm ủộc sau nhiều ủời cấy truyền qua phụi gà, chủng H (Hertfordshire) ủược làm giảm ủộc sau 33 ủời cấy, chủng Komarov hay Haifa ủược làm giảm ủộc sau nhiều ủời cấy chuyển qua úc vịt. đối với gà, ủộc lực của vacxin cũn cao, nờn khi dựng cho gà con dưới hai thỏng tuổi dễ gõy phản ứng.
Trong cơ thể gà, virut nhúm mesogen cú khả năng nhõn lờn trong tế
bào của nhiều loại mụ (Rott, 1979)[82]. Cho nờn khi ủưa vacxin vào cơ thể, cú thể sử dụng nhiều phương phỏp: nhỏ mắt, nhỏ mũi, tiờm dưới da, tiờm bắp
ủều tạo ủược miễn dịch tốt.
* Vacxin vụ hoạt
Vacxin vụ hoạt sản xuất từ những virut sống, ủược xử lý bằng formalin hoặc Betaprpiolactone, sau ủú bổ xung thờm chất bổ trợ ủể làm tăng tớnh miễn dịch của vacxin. Lỳc ủầu ủể vụ hoạt virut, thường dựng
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 34
betapropiolactone và formalin (Hofstad, 1953)[60]. Sau ủú Palhidy (1985)[16] ủó chứng minh vacxin dựng etilenimin ủể vụ hoạt virut, gõy ủỏp
ứng miễn dịch tốt hơn so với betapropiolactone, formalin, etylentilenimin và
ủồng thời khụng gõy biến ủổi cấu trỳc protein của virut.
Trong vacxin vụ hoạt, cỏc chất bổ trợ cú ảnh hưởng quyết ủịnh ủến tỏc dụng gõy miễn dịch của thành phần khỏng nguyờn (Franchini, 1995)[48]. đầu tiờn, chất bổ trợ ủược dựng là keo phốn (Aluminum hydroxit) (Alexander, 1991)[29, 511]. Vacxin vụ hoạt cú chất bổ trợ là keo phốn, khi sử dụng phũng bệnh cho gà, tạo ủỏp ứng miễn dịch thấp, ủộ dài miễn dịch ngắn.
Theo Palhidy (1985)[16] keo phốn kớch thớch sinh ủỏp ứng miễn dịch ở
gia cầm kộm. Sau ủú, vacxin cú bổ trợ nhũ dầu ủược thay thế vỡ hiệu quả
phũng bệnh cao hơn (Cross, 1988)[45, 333-346).
Virut Newcastle dựng ủể sản xuất vacxin nhũ dầu gồm cỏc chủng virut vacxin thuộc nhúm Lentogen như: Ulster 2C, B1, Lasota, nhúm mesogen cú Roakin và vài chủng virut cú ủộc lực cao.
Hiện nay hầu hết cỏc vacxin Newcastle vụ hoạt ủược sản xuất từ những chủng virut cú ủộc lực yếu như: Lasota. B1... Vacxin vụ hoạt ủược sản xuất từ
chủng virut ủộc lực yếu cú ưu ủiểm rất an toàn.
Alexander (1991)[29, 512] cho biết vacxin nhũ dầu cho ủỏp ứng miễn dịch cao, thời gian duy trỡ miễn dịch dài.
2.4.3.2. Vấn ủề phũng bệnh Newcastle.
Cho ủến nay bệnh Newcastle vẫn cũn là mối ủe dọa nguy hiểm cho ngành chăn nuụi gia cầm ở nhiều nước trờn thế giới. Ở Băngladet, hàng năm bệnh Newcastle gõy chết khoảng 15% tổng số gà trong cả nước, gõy thiệt hại về kinh tế ước chừng 3,8 triệu ủụ la (Aboul Hakim, 1986)[1]. Trong khi ủú, việc buụn bỏn cỏc sản phẩm của gia cầm và con giống mang tớnh chất ủa quốc gia, làm cho bệnh Newcastle càng trở nờn nghiờm trọng. Việc khống chế
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 35
bệnh Newcastle chỉ thực hiện ủược khi tất cả cỏc nước ủều chỳ trọng cụng tỏc phũng bệnh.
Chương trỡnh phũng chống bệnh Newcastle ở cỏc nước khụng giống nhau, nú cũn tựy thuộc vào ủiều kiện kinh tế, xó hội và ủiều kiện khớ hậu... Một vài nước như Northern Ireland cấm sử dụng vacxin ủể phũng bệnh cho
ủàn gà lại là việc phải làm Higgins, 1988[59, 273-302]. Trong quỏ trỡnh phũng bệnh Newcastle, cú thể dựng vacxin vụ hoạt và vacxin nhược ủộc.
Bennejean (1988)[41, 303-317] cho biết khi dựng vacxin nhược ủộc, virut vẫn nhõn lờn và tàng trữ trong cơ thể. Với chủng virut nhược ủộc cú IPVI >0,7, virut cú thể trỗi dậy là nguyờn nhõn gõy nờn dịch bệnh. Vỡ vậy, tựy từng nước, loại vacxin sử dụng cú khỏc nhau. Cú nước chỉ dựng vacxin nhược
ủộc thuộc nhúm lentogen và vacxin vụ hoạt. Cú nước dựng vacxin nhược ủộc của cả hai nhúm Lentogen, Mesogen và vacxin vụ hoạt.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 36
Phần 3. đỐI TƯỢNG, đỊA đIỂM, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG
PHÁP NGHIấN CỨU
3.1. đỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU
- đà ủiểu Chõu Phi ở cỏc lứa tuổi khỏc nhau và ủà ủiểu sinh sản nuụi tại Trạm nghiờn cứu chăn nuụi ủà ủiểu Ba Vỡ và ở một số cơ sở ủược chuyển giao con giống từ Trạm nghiờn cứu chăn nuụi ủà ủiểu Ba Vỡ.
- Vacxin Medivac ND Lasota của hóng Medion -Indonesia, là vacxin sống ủụng khụ, cú nước pha kốm theo.
Virut vacxin ủược nuụi cấy trong ủiều kiện vụ trựng SPF. Mỗi liều vacxin chứa 107 EID50 virut Lasota sống nhược ủộc.
- Vacxin Medivac ND Emulsion của hóng Medion Ờ Indonesia: là vacxin vụ hoạt dạng nhũ dầu, Mỗi liều chứa 50 PD50 virut.
- Gà lấy mỏu: sử dụng gà trống khỏe mạnh, cú phản ứng HI õm tớnh ủể
lấy hồng cầu.
- Virut Newcastle cường ủộc: chủng VN91 do Trung tõm kiểm nghiệm thuốc thỳ y trung ương I cung cấp.
Dụng cụ, thiết bị phũng thớ nghiệm cần thiết khỏc (Tại phũng virut Ờ Trung tõm chẩn ủoỏn thỳ y Trung ương Ờ Cục thỳ y)
3.2. đỊA đIỂM VÀ THỜI GIAN
- địa ủiểm nghiờn cứu:
+ Trạm nghiờn cứu chăn nuụi ủà ủiểu Ba Vỡ - Hà Nội + Trung tõm chẩn ủoỏn thỳ y Trung ương Ờ Cục thỳ y.
- Thời gian nghiờn cứu: Từ năm 2009 ủến thỏng 10 năm 2010.
3.3. NỘI DUNG NGHIấN CỨU
để thực hiện ủề tài này chỳng tụi tiến hành nghiờn cứu với cỏc nội dung sau:
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 37
- Xỏc ủịnh hàm lượng khỏng thể Newcastle của ủà ủiểu sinh sản sau khi tiờm vacxin Medivac ND Emulsion vào thời ủiểm trước vụủẻ.
- Xỏc ủịnh diễn biến khỏng thể thụủộng Newcastle ởủà ủiểu con. - Xỏc ủịnh ủỏp ứng miễn dịch Newcastle của ủàn ủà ủiểu con khi sử
dụng vacxin Newcastle với cỏc liều khỏc nhau.
- Xỏc ủịnh ngưỡng khỏng thểủể bảo hộ cho ủà ủiểu với bệnh Newcastle. - Xõy dựng chương trỡnh sử dụng vacxin Newcastle ủể phũng bệnh cho
ủà ủiểu Chõu Phi
3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU 3.4.1. Phương phỏp bố trớ thớ nghiệm
* Thớ nghiệm 1: xỏc ủịnh diễn biến hàm lượng khỏng thể Newcastle của ủà ủiểu sinh sản
- Lựa chọn liều tiờm thớch hợp: bố trớ 18 ủà ủiểu sinh sản, chia làm 3 lụ (Lụ I, II, III), sử dụng vacxin medivac ND Emulsion tiờm dưới da cỏnh với 3 mức liều khỏc nhau: 1ml; 2ml và 5ml (tương ứng với 2 liều; 4 liều và 10 liều của gà). Kiểm tra hàm lượng khỏng thể thụng qua hiệu giỏ phản ứng HI trước và sau 30 ngày tiờm vacxin, theo sơ ủồ:
Lụ thớ
nghiệm n
Liều vacxin Kiểm tra hiệu giỏ HI (log2) sau khi tiờm vacxin (ngày)
I 6 1 ml 30
II 6 2 ml 30
II 6 5 ml 30
- Sau khi ủó lựa chon ủược liều tiờm thớch hợp, tiến hành tiờm vacxin ND Emulsion ủại trà cho ủàn ủà ủiểu sinh sản và theo dừi diễn biến khỏng thể
Newcastle của ủà ủiểu mẹ sau khi tiờm vacxin Medicac ND Emulsion. Tiến hành theo dừi trờn 10 ủà ủiểu mẹ. Sau khi tiờm vacxin 1 thỏng; 3 thỏng; 6
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 38
thỏng; 8 thỏng; 9 thỏng; 12 thỏng, tiến hành kiểm tra hàm lượng khỏng thể
Newcastle trong mỏu bằng phản ứng HI:
n Kiểm tra hiệu giỏ HI (log2) sau khi tiờm vacxin (thỏng)
10 1 3 6 8 9 12
* Thớ nghiệm 2: xỏc ủịnh diễn biến khỏng thể thụủộng Newcastle ởủà
ủiểu con.
đà ủiểu mẹ tại cỏc thời ủiểm kiểm tra khỏng thể Newcastle ở thớ nghiệm 1, sau 3 thỏng; 6 thỏng; 8 thỏng; 9 thỏng và 12 thỏng tiờm vacxin (ở
thời ủiểm sau khi tiờm vacxin 1 thỏng do số lượng trứng cũng như số con nở
ớt nờn khụng tiến hành kiểm tra), tiến hành thu trứng ủem ấp sau ủú kiểm tra khỏng thể thụ ủộng ở ủà ủiểu con thụng qua hiệu giỏ phản ứng HI ở cỏc thời
ủiểm sau:
n Thời ủiểm kiểm tra hiệu giỏ HI (log2)ởủà ủiểu con (ngày tuổi)
≥5 1 7 14 21 28 35 Ầ.
Trờn cơ sở diễn biến hàm lượng khỏng thể thụủộng xỏc ủịnh thời ủiểm thớch hợp dựng liều vacxin ủầu tiờn cho ủà ủiểu con (khi HI ≤ 4 log2).
* Thớ nghiệm 3: xỏc ủịnh hàm lượng khỏng thể Newcastle của ủàn ủà
ủiểu con khi sử dụng vacxin với cỏc liều khỏc nhau, theo sơủồ sau Phũng vacxin Lụ I (n=8) Lụ II (n=8) Lụ III (n=8) Ghi chỳ Lần 1 (21 ngày tuổi) 2 3 4 Lần 2 4 6 6 Lần 3 3 4 5
Lụ 2 theo quy trỡnh Trung quốc. Cỏc số trong 3 lụ là số nhõn của
liều gà
Thớ nghiệm ủược bố trớ gồm 24 ủà ủiểu con, chia làm 3 lụ thớ nghiệm (Lụ I; Lụ II; Lụ III). Tiến hành phũng vacxin với cỏc liều khỏc nhau, dựa trờn
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 39
cơ sở quy trỡnh sử dụng vacxin của Trung tõm nghiờn cứu gia cầm Thụy Phương và quy trỡnh ở Trung quốc. Mọi chế ủộ chăm súc nuụi dưỡng ở 3 lụ thớ nghiệm là như nhau.
đà ủiểu dưới 45 ngày tuổi sử dụng vacxin ND Lasota (nhỏ mũi), ủà
ủiểu trờn 45 ngày tuổi tiờm dưới da cỏnh vacxin ND Emulsion.
- Kiểm tra hiệu giỏ HI sau 7, 14, 21, 30Ầ ngày sử dụng vacxin lần 1 - Kiểm tra hiệu giỏ HI sau 7, 14, 21, 30, 60 ngày sử dụng vacxin lần 2 - Kiểm tra hiệu giỏ HI sau 14, 21, 30, 60, 90, 120 ngày tiờm vacxin lần3 Dựa trờn cơ sở diễn biến hàm lượng khỏng thể ủể tiờm nhắc lại vacxin cho ủà ủiểu (khi hiệu giỏ HI ≤ 4 log2).
*Thớ nghiệm 4: xỏc ủịnh ngưỡng khỏng thể ủể bảo hộ cho ủiểu với bệnh Newcastle
Tiến hành cụng cường ủộc trờn ủà ủiểu sau khi tiờm vacxin ND Emusion lần 1 ủược 30 ngày (2,5 thỏng tuổi): Nhúm ủà ủiểu thớ nghiệm (6 ủà
ủiểu) ủược tiờm phũng vacxin Newcastle, Nhúm ủối chứng (03 ủà ủiểu) khụng tiờm vacxin Newcastle. Trước và sau khi tiến hành cụng cường ủộc tiến hành kiểm tra hàm lượng khỏng thể Newcastle thụng qua hiệu giỏ phản
ứng HI. Theo dừi, triệu chứng, cỏc biểu hiện bất thường khỏc, bệnh tớch và tỷ
lệ bảo hộ...
Thớ nghiệm ủược tiến hành tại Trung tõm chẩn ủoỏn thỳ y Trung ương Ờ Cục thỳ y.