Cỏc số liệu thu thập ủược, ủược sử lý theo phương phỏp thống kờ sinh học trờn chương trỡnh Excel và Minitab 15.1, so sỏnh theo phương phỏp giỏ trị
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 45
Phần 4. KẾT QUẢ NGHIấN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1. đÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA đÀ đIỂU VỚI VACXIN NEWCASLE
Chỳng tụi ủó tiến hành nghiờn cứu ủỏp ứng miễn dịch của ủà ủiểu sinh sản với vacxin Newcastle và sự tương quan giữa hàm lượng khỏng thể của ủà
ủiểu mẹ với khỏng thể thụủộng ởủà ủiểu con 1 ngày tuổi và thu ủược kết quả
như sau:
4.1.1. đỏp ứng miễn dịch của ủà ủiểu sinh sản với vacxin Newcastle
để phũng bệnh Newcastle cú hiệu quả, thỡ biện phỏp quyết ủịnh là sử
dụng vacxin tạo miễn dịch chủ ủộng cho ủà ủiểu, trong quỏ trỡnh sử dụng vacxin thỡ cú nhiều yếu tố ảnh hưởng ủến khả năng sản sinh khỏng thể ủặc hiệu, trong ủú cú yếu tố liều lượng vacxin (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978)[17, 30]. Liều lượng vacxin phải thớch hợp thỡ khỏng thể mới sinh ra nhiều.
đà ủiểu thuộc lớp chim nhưng cú khối lượng rất lớn (110-170 kg) vỡ vậy khi phũng cho chỳng bằng vacxin ủặc hiệu cho gà cần phải xỏc ủịnh liều lượng phự hợp ủể cho ủỏp ứng miễn dịch tốt nhất. để chọn lựa liều vacxin thớch hợp tiờm cho ủà ủiểu sinh sản, dựa trờn cơ sở quy trỡnh sử dụng vacxin của Trung tõm nghiờn cứu gia cầm Thụy Phương và quy trỡnh sử dụng vacxin của Trung quốc. Chỳng tụi tiến hành bố trớ thớ nghiệm trờn ủàn ủà ủiểu sinh sản, vào thời ủiểm trước khi vào vụ ủẻ, gồm 18 ủà ủiểu sinh sản ủược chia làm 3 lụ ( Lụ I, Lụ II, Lụ III ) và tiờm vacxin với cỏc liều khỏc nhau (1ml; 2ml; 5ml) tương ứng với 2 liều; 4 liều và 10 liều sử dụng cho gà. Trước và sau khi tiờm vacxin 30 ngày (tớnh từ thời ủiểm tiờm vacxin) lấy mỏu chắt huyết thanh ủể kiểm tra hàm lượng khỏng thể thụng qua hiệu giỏ của phản
ứng HI. Kết quả thu ủược trỡnh bày ở bảng 4.1.
Kết quả cho thấy, Sau 30 ngày tiờm vacxin Medivac ND Emulsion ủà
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 46
sau khi tiờm vacxin 30 ngày, hiệu giỏ HI bỡnh quõn ủạt 8,17 ổ 0,31 log2, 100% số mẫu huyết thanh kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2.
- Ở lụ II, sử dụng 4 liều gà (2 ml ) sau khi tiờm vacxin 30 ngày, hiệu giỏ HI bỡnh quõn ủạt 10,17 ổ 0,31 log2, 100% số mẫu huyết thanh kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2.
- Ở lụ III, sử dụng 10 liều gà (5 ml ) sau khi tiờm vacxin 30 ngày, hiệu giỏ HI bỡnh quõn ủạt 10,00 ổ 0,52 log2, 100% số mẫu huyết thanh kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2.
Bảng 4.1. Hàm lượng khỏng thể Newcastle ởủà ủiểu sinh sản khi tiờm vacxin ND Emulsion với liều khỏc nhau
Hiệu giỏ HI (log2) bỡnh quõn (X ổ mx)
Lụ
TN n vacxin Liều
Trước khi tiờm Sau khi tiờm vacxin 30 ngày
Tỷ lệ (%) HI ≥ 4 log2
I 6 1 ml 5,33 ổ 0,42 8,17a ổ 0,31 100 II 6 2 ml 5,33 ổ 0,33 10,17b ổ 0,31 100 III 6 5 ml 5,17 ổ 0,40 10,00b ổ 0,52 100
Ghi chỳ: TN: thớ nghiệm; cỏc số trong cựng 1 cột mang chữ cỏi khỏc nhau thỡ khỏc nhau cú ý nghĩa thống kờ.
So sỏnh hiệu giỏ HI (log2) bỡnh quõn tại thời ủiểm sau khi tiờm vacxin 30 ngày ở 3 lụ cho thấy giữa lụ I với lụ II và lụ III cú sự sai khỏc. Lụ I cú hiệu giỏ HI bỡnh quõn thấp hơn lụ II và lụ III, so sỏnh giữa lụ II và lụ III thấy hiệu giỏ HI (log2) bỡnh quõn là tương ủương nhau ở thời ủiểm sau 30 ngày tiờm vacxin (p<0,05).
Theo Nguyễn Vĩnh Phước (1978)[17, 30] cho biết, số lượng virut trong vacxin cú ảnh hưởng ủến lượng khỏng thể Newcastle ủược sinh ra. Lượng khỏng nguyờn càng nhiều thỡ lượng khỏng thể càng tăng cao. Tuy nhiờn cú
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 47
giới hạn nhất ủịnh, nếu khỏng nguyờn quỏ nhiều sẽ gõy ức chế miễn dịch. Liều lượng khỏng nguyờn (vacxin) phải thớch hợp thỡ khỏng thể mới sinh ra nhiều. Từ kết quả thực nghiệm trờn chỳng tụi nhận thấy liều vacxin thớch hợp sử dụng tiờm cho ủà ủiểu sinh sản là 2 ml / con (4 liều gà). Kết quả nghiờn cứu này cũng phự hợp với liều vacxin theo khuyến cỏo của Alexander (2000) và Fan Jishan (2004)[30];[9], ủú là tiờm 2 ml Ờ 5 ml / con với vacxin nhũ dầu hàng năm cho ủàn ủà ủiểu sinh sản.
4.1.2. Diễn biến hàm lượng khỏng thể chủủộng Newcastle ởủà ủiểu mẹ
Diễn biến hàm lượng khỏng thể chủ ủộng Newcastle của ủà ủiểu mẹ
sau khi tiờm vacxin cú vai trũ quan trọng trong việc xỏc ủịnh thời ủiểm thớch hợp ủể tiờm phũng nhắc lại, tạo miễn dịch chủ ủộng liờn tục cú khả năng bảo vệ khi cú sự tấn cụng của virut Newcastle cường ủộc. Chớnh vỡ vậy việc nghiờn cứu diễn biến hàm lượng khỏng thể sau khi tiờm vacxin Newcastle cho
ủà ủiểu mẹ là rất cần thiết ủể từủú ủưa ra ủược quy trỡnh sử dụng vacxin thớch hợp, ủảm bảo an toàn cho ủà ủiểu sinh sản.
để nghiờn cứu chỉ tiờu này, chỳng tụi tiến hành khảo sỏt trờn 10 ủà ủiểu mỏi sau khi tiờm vacxin Medivac ND Emulsion (tiờm dưới da cỏnh) với liều 2 ml / con ( gấp 4 liều gà), vào thời ủiểm trước vụủẻ 1 thỏng, hiệu giỏ HI bỡnh quõn trước khi tiờm vacxin ủạt 5,8 ổ 0,33 log2) và 100% số mẫu huyết thanh kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2. Sau khi tiờm vacxin 1 thỏng; 3 thỏng; 6 thỏng; 8 thỏng; 9 thỏng và 12 thỏng, chỳng tụi tiến hành lấy mỏu chắt huyết thanh làm phản ứng HI ủể xỏc ủịnh hàm lượng khỏng thể Newcastle. Kết trỡnh bày ở bảng 4.2.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 48
Bảng 4.2. Diễn biến khỏng thể Newcastle của ủà ủiểu mẹ sau khi tiờm vacxin ND Emulsion Hiệu giỏ HI (log2) Thời gian sau khi tiờm vacxin (thỏng) n 4 5 6 7 8 9 10 11 Hiệu giỏ HI bỡnh quõn (X ổ mx) HI ≥ 4 log2 (%) 1 10 2 7 1 9,9 ổ 0,18 100 3 10 1 3 4 2 8,7 ổ 0,30 100 6 10 3 5 2 7,9 ổ 0,23 100 8 10 2 6 2 7,0 ổ 0,21 100 9 10 1 1 4 4 6,5 ổ 0,21 100 12 10 1 3 2 4 5,6 ổ 0,27 100 Kết quả cho thấy: đà ủiểu cú ủỏp ứng miễn dịch cao nhất ở thời ủiểm sau 1 thỏng tiờm vacxin, sau ủú khỏng thể giảm dần.
- Sau khi tiờm vacxin 1 thỏng, cỏc mẫu huyết thanh kiểm tra ủều cú hiệu giỏ HI cao từ 9 log2 ủến 11 log2, HI bỡnh quõn ủạt 9,9 ổ 0,18 (log2), 100%
ủà ủiểu cú khỏng thể chống bệnh Newcastle trong mỏu với hàm lượng cao. Như vậy 100% sốủà ủiểu theo dừi ủược bảo hộ với bệnh ở mức ủộ cao.
Diễn biến khỏng thể của ủà ủiểu sinh sản 5.80 9.90 8.70 7.90 7.00 6.50 5.60 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 tr−ớc khi tiêm 1tháng 3thá ng 6thá ng 8thá ng 9thá ng 12th áng thỏng H I (l o g 2 ) HI
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 49
- Khảo sỏt hàm lượng khỏng thểở cỏc thời ủiểm sau khi tiờm vacxin 3 thỏng; 6 thỏng; 8 thỏng; 9 thỏng và 12 thỏng, chỳng tụi thấy hàm lượng khỏng thể này giảm dần, với hiệu giỏ HI bỡnh quõn lần lượt tương ứng là: 8,7ổ0,30 (log2); 7,9 ổ 0,23 (log2); 7,0 ổ 0,21 (log2); 6,5 ổ 0,21 (log2) và 5,6 ổ 0,27 (log2), với 100% số mẫu kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2 ở cỏc thời ủiểm trờn. Như vậy qua kết quả khảo sỏt cho thấy ủà ủiểu mẹ cho ủỏp ứng miễn dịch cao sau khi tiờm vacxin và miễn dịch cú khả năng bảo hộ bệnh kộo dài 12 thỏng.
Như vậy ở ủà ủiểu sinh sản vacxin Newcastle chỉ cần tiờm 1 lần ủủủể
cú miễn dịch bảo hộ với bệnh trong vũng 1 năm.
Từ kết quả nghiờn cứu thực nghiệm chỳng tụi ủưa ra kết luận. lịch phũng vacxin Newcastle thớch hợp cho ủà ủiểu sinh sản là tiờm 1 lần / năm với liều 2 ml / con, ủủủểủà ủiểu cú miễn dịch bảo hộ với bệnh Newcastle.
Kết quả nghiờn cứu của chỳng tụi cũng phự hợp với kết quả nghiờn cứu và khuyến cỏo của một số tỏc giả trờn thế giới như: Fan jishan (2004)[9], Perelman (2000)[77], ủú là ở ủà ủiểu sinh sản vacxin Newcastle chỉ cần tiờm 1 lần / năm vào mựa ủụng. Do ủú chỳng tụi tiến hành tiờm ủại trà cho toàn
ủàn ủà ủiểu sinh sản.
4.1.3. Tương quan giữa hàm lượng khỏng thể Newcastle ởủà ủiểu mẹ với khỏng thể thụủộng ởủà ủiểu con khỏng thể thụủộng ởủà ủiểu con
để cú cơ sở khoa học, nhằm kộo dài thời gian miễn dịch bằng khỏng thể thụủộng hoặc tạo ra một miễn dịch chủủộng ủảm bảo an toàn cho ủà ủiểu con trong giai ủoạn ủầu của cuộc sống. Việc xỏc ủịnh mối tương quan giữa hàm lượng khỏng thể cú trong cơ thểủà ủiểu mẹ với hàm lượng khỏng thể thụ ủộng ở ủà ủiểu con, cựng với diễn biến của hàm lượng khỏng thể thụ ủộng này, ủể từ ủú xỏc ủịnh thời ủiểm thớch hợp tỏc ủộng liều vacxin lần ủầu tiờn gõy miễn dịch chủ ủộng tốt nhất, duy trỡ miễn dịch bảo hộ bệnh là việc làm cần thiết. Theo Trần Thị Lan Hương (2001)[12], nghiờn cứu trờn gà cho biết:
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 50
Hàm lượng khỏng thể Newcastle của gà mẹ và hàm lượng khỏng thể thụủộng
ở gà con 1 ngày tuổi cú mối tương quan chặt chẽ và ủồng biến.
Thớ nghiệm ủược chỳng tụi tiến hành trờn ủàn ủà ủiểu mẹ, sau khi tiờm vacxin Medivac ND Emulsion 2 ml / con, ở cỏc thời ủiểm sau khi tiờm vacxin 3 thỏng; 6 thỏng; 8 thỏng; 9 thỏng và 12 thỏng (tớnh từ thời ủiểm tiờm vacxin), chỳng tụi tiến hành lấy mỏu ủà ủiểu làm phản ứng HI xỏc ủịnh hàm lượng khỏng thể Newcastle. Trứng của chỳng ủẻ ra trong từng thời ủiểm trờn
ủược ủỏnh dấu, ấp nở và kiểm tra hàm lượng khỏng thể thụủộng ở những ủà
ủiểu con này vào lỳc 1 ngày tuổi bằng phản ứng HI. Chỳng tụi ủó khảo sỏt và thu ủược kết quả trỡnh bày ở bảng 4.3.
Bảng 4.3. Tương quan giữa hàm lượng khỏng thể Newcastle ởủà ủiểu mẹ
với khỏng thể thụủộng ởủà ủiểu con (1 ngày tuổi) Thời gian sau khi tiờm vacxin (thỏng) đối tượng Nghiờn cứu Số mẫu kiểm tra Hiệu giỏ HI bỡnh quõn (X ổ mx) Số mẫu cú khỏng thể (%) HI ≥ 4 log2 (%) đà ủiểu mẹ 10 8,70 ổ 0,30 100 100 3 đà ủiểu con 10 7,50 ổ 0,27 100 100 đà ủiểu mẹ 10 7,90 ổ 0,23 100 100 6 đà ủiểu con 10 6,80 ổ 0,33 100 100 đà ủiểu mẹ 10 7,00 ổ 0,21 100 100 8 đà ủiểu con 10 5,80 ổ 0,20 100 100 đà ủiểu mẹ 10 6,50 ổ 0,27 100 100 9 đà ủiểu con 10 5,60 ổ 0,24 100 100 đà ủiểu mẹ 10 5,60 ổ 0,27 100 100 12 đà ủiểu con 10 4,40 ổ 0,40 100 80
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 51
Kết quả cho thấy giữa khỏng thểủà ủiểu mẹ và ủà ủiểu con 1 ngày tuổi cú sự tương quan chặt chẽ, cụ thể:
- đà ủiểu mẹ sau khi tiờm vacxin 3 thỏng, hiệu giỏ HI bỡnh quõn ủạt 8,7 ổ 0,30 (log2). Toàn bộ số ủà ủiểu con nở ra từ trứng ở thời ủiểm này ủược truyền khỏng thể thụủộng với 100% số mẫu huyết thanh kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2 với hiệu giỏ HI bỡnh quõn ủạt 7,50 log2 .So sỏnh hiệu giỏ khỏng thể giữa ủàn mẹ và ủàn con (tại thời ủiểm 1 ngày tuổi) ở thời ủiểm này cho thấy ủà ủiểu con cú hiệu giỏ khỏng thể thụủộng bằng 86,21 % hiệu giỏ khỏng thể cú trong huyết thanh ủàn ủà ủiểu mẹ.
- Kết quả khi khảo sỏt hàm lượng khỏng thể Newcastle trờn ủàn ủà ủiểu mẹ, ở cỏc thời ủiểm 6 thỏng; 8 thỏng; 9 thỏng và 12 thỏng sau khi tiờm vacxin ND Emulsion chỳng tụi thấy hàm lượng khỏng thể này giảm dần: hiệu giỏ HI bỡnh quõn từ 8,7 log2 ở thời ủiểm 3 thỏng sau khi tiờm vacxin và cỏc thỏng tương ứng 7,9 log2 ; 7,0 log2 ; 6,5 log2 và 5,6 log2. đặc biệt ở thỏng thứ 12 vẫn cú 100 % số mẫu kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2.
Trờn ủàn con nở ra từ trứng của ủàn ủà ủiểu mẹ ở cỏc thời ủiểm khảo sỏt, hàm lượng khỏng thể biểu hiện bằng hiệu giỏ phản ứng HI kiểm tra ở 1 ngày tuổi cũng giảm dần tương ứng với sự giảm của hàm lượng khỏng thể cú trong huyết thanh của ủàn ủà ủiểu mẹ, cụ thể: đà ủiểu con nở ra từ ủàn ủà
ủiểu mẹ sau khi tiờm vacxin 6 thỏng, kiểm tra lỳc 1 ngày tuổi thấy lượng khỏng thể thụ ủộng biểu hiện bằng hiệu giỏ HI kiểm tra ủược là 6,8 log2; tương tựở cỏc thỏng sau ủú kiểm tra trờn cỏc ủàn ủà ủiểu con tương ứng, hiệu giỏ HI lần lượt là : 5,8 log2; 5,6 log2 và 4,4 log2. điều ủỏng chỳ ý ở ủõy là ở
thời ủiểm sau khi tiờm vacxin 12 thỏng, ủà ủiểu con nở ra từủàn ủà ủiểu mẹ
cú hàm lượng khỏng thể thụủộng 4,4 log2 lỳc 1 ngày tuổi, nhưng chỉ cú 80 % số mẫu huyết thanh cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2 trong 100% mẫu phỏt hiện cú khỏng thể. Như vậy thời ủiểm này chỳng ta cần chuẩn bị kế hoạch tiờm nhắc
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 52
lại cho ủàn ủà ủiểu mẹ ủể tăng cường miễn dịch thụ ủộng cho ủàn con, ủồng thời tăng cường miễn dịch bảo hộ cao cho ủàn mẹ.
Từ nghiờn cứu thực nghiệm chỳng tụi nhận thấy: cũng như ở gà, ủà
ủiểu mẹ cú khỏng thể Newcastle sẽ truyền khỏng thể cho ủà ủiểu con, hàm lượng khỏng thể Newcastle trong huyết thanh ủà ủiểu mẹ và hàm lượng khỏng thể thụủộng ởủàn con cú mối tương quan thuận.
Chỳng tụi tiếp tục khảo sỏt chi tiết trờn những ủà ủiểu con nở ra từ ủà
ủiểu mẹ cú cựng hiệu giỏ HI và ở cỏc nhúm ủà ủiểu mẹ cú mức HI khỏc nhau, kết quả cho thấy một lần nữa chứng tỏ cú mối tương quan thuận giữa khỏng thể chủủộng ở ủà ủiểu mẹ với khỏng thể thụủộng ởủà ủiểu con (bảng 4.4).
đà ủiểu mẹ cú hiệu giỏ HI là 9 log2, ủàn con cú hiệu giỏ HI bỡnh quõn 7,6 log2 và 100% số mẫu kiểm tra cú hiệu giỏ HI≥ 4log2; ủà ủiểu mẹ cú hiệu
giỏ HI là 8 log2, ủàn con cú hiệu giỏ HI bỡnh quõn 6,7 log2 và 100% số mẫu kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2; ủà ủiểu mẹ cú hiệu giỏ HI là 7 log2, ủàn con
cú hiệu giỏ HI bỡnh quõn 5,6 log2 và 100% số mẫu kiểm tra cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2; ủà ủiểu mẹ cú hiệu giỏ HI là 6 log2, ủàn con cú hiệu giỏ HI bỡnh quõn 4,6 log2, 100% số mẫu kiểm tra vẫn cú hiệu giỏ HI ≥ 4 log2; khi ủà ủiểu mẹ cú
hiệu giỏ HI = 5 log2, ủàn con cú hiệu giỏ HI bỡnh quõn thấp ủạt 3,8 log2 và chỉ