Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...32 Theo Tô Long Thành, 2000 [23], ñối với bệnh LMLM người ta chủ yếu sử dụng vacxin vô hoạt. Vacxin nhược ñộc LMLM người ta ít dùng, do tác dụng không mong muốn có thể xảy ra ở gia súc non, vi rút nhược ñộc có khả năng quay lại cường ñộc. Vacxin LMLM là các chế phẩm bắt nguồn từ nước cấy tổ chức mô hay nuôi cấy tế bào ñược gây nhiễm vi rút, sau khi làm sạch, vô hoạt các chế phẩm này và ñược bổ sung thêm một chất bổ trợ thích hợp. Nhiều vacxin LMLM là vacxin ña giá ñể có thể kích thích ñáp ứng miễn dịch chống lại nhiều typ vi rút mà con vật có thể nhiễm phải trong một môi trường cụ thể nào ñó. Do ngoài thực ñịa vi rút LMLM biến dị liên tục nên vi rút dùng ñể chế vacxin cũng phải thay ñổi theo.
Trong những năm gần ñây, nhiều nước ñã ñạt ñược những kết quả bước ñầu trong việc khống chế bệnh LMLM nhờ thực hiện tiêm phòng vacxin cho ñại bộ phận cá thể trong quần thể [15].
1.7.2.1. Vacxin focmon keo phèn
Vacxin focmon keo phèn ñược chế tạo theo phương pháp của Vallée (1925), Smith (1938) và Waldmann (1938), các typ vi rút gây bệnh ñược lấy từ mụn nước, vết loét ở niêm mạc miệng của bò ốm ñem tiêm truyền cho bò khoẻ bằng cách tiêm vào cơ lưỡi hay chỗ khía trên da lưỡi. Sau 24 giờ, lưỡi hình thành các mụn nước, lấy dịch lâm ba trong ở trong mụn nước, bảo quản lạnh 4ºC. Khi chế vacxin ñem hoà với nước sinh lý thành huyễn dịch 1% thêm keo phèn và vô họat bằng focmon. Tuỳ trọng lượng trâu bò, liều tiêm dưới da có thể từ 15-60 ml, miễn dịch có ñược sau 8-20 ngày và duy trì trong 8-10 tháng. Vacxin có ñộ an toàn cao có thể tiêm cho gia súc non và con cái có chửa. Chỉ tiêm cho những con không mắc bệnh.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...33 Phương pháp nuôi cấy vi rút gây bệnh LMLM trên tế bào ñược Frenkel ñưa ra vào những năm 1947- 1951. Hiện nay, phương pháp này ñã ñược hoàn thiện và ñược sử dụng trong các nhà máy sản xuất vacxin.
Chủng vi rút thích hợp ñược chọn ñể gây nhiễm cho tế bào dòng, ví dụ tế bào BHK, hoặc tế bào biểu mô của lưỡi bò khoẻ. Khi hiệu giá vi rút ñạt tối ña thì thu hoạch nước nổi, rồi ly tâm và lọc vô khuẩn. Sau ñó vô hoạt vi rút bằng ethylenimin (EI) ở nồng ñộ 0,05% trong 24- 48 giờ với nhiệt ñộ 20-37ºC, hấp phụ lên gel hydroxyt nhôm và cho thêm saponin hoặc dầu khoáng vào làm chất bổ trợ.
Vacxin LMLM chế từ môi trường tế bào nuôi, vô hoạt bằng binary ethylenimin tạo nhũ với chất bổ trợ dầu là vacxin hữu hiệu nhất ñể gây miễn dịch cho gia súc chống lại bệnh LMLM.
1.7.2.3. Vacxin nhược ñộc
Cấy vi rút LMLM cho chuột chưa cai sữa (Skiner, 1951), lên phôi gà một ngày tuổi (Skiner, 1954; Gillespic, 1954), hoặc tiếp ñời nhiều lần trên tế bào nuôi ñã làm cho vi rút giảm ñộc lực có thể làm vacxin tiêm phòng cho gia súc. Vacxin này có ưu ñiểm, có thể tạo ñáp ứng miễn dịch dài hơn so với vacxin vô hoạt, nhưng có nhược ñiểm là tác dụng không mong muốn có thể xảy ra ở gia súc non, vi rút nhược ñộc có khả năng quay lại cường ñộc. Hiện nay chỉ có Venezuela dùng vacxin nhược ñộc phòng bệnh LMLM trên bò.
1.7.2.4. Vacxin sản xuất theo công nghệ gen
Vacxin này ñược phát triển trên cơ sở công nghệ gen. Ưu ñiểm chính của các vacxin sản xuất theo công nghệ gen là cực kỳ an toàn và không cần bảo quản lạnh. Nhưng hiện nay chưa ñược sản xuất thương mại do nhược ñiểm cơ bản là giá thành quá cao, không phù hợp với sản xuất.
Nguyên lý của việc sản xuất vacxin theo công nghệ gen là tách axít nucleic của vi rút LMLM, xác ñịnh vị trí gen mà ta quan tâm, cắt và gắn ñoạn
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...34 gen ñó vào một véc tơ ñể sản xuất, tiến hành sản xuất vacxin trên các hệ thống tế bào phù hợp.
Vi rút LMLM cấu tạo bởi một sợi ARN có khoảng 8000 nucleotit, nhân ñược bao bọc bởi 4 protein capxít có tên là VP1, VP2, VP3, VP4. Trong ñó protein VP1 ñã ñược xác ñịnh có tính sinh miễn dịch và nó ñược khi tách khỏi các protein kia ñể chế vacxin. Phương pháp sản xuất protein VP1 nhân tạo thông qua việc gắn gen VP1 vào một vi sinh vật khác nhằm sản xuất kháng nguyên vi rút LMLM tinh khiết.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...35
Chương 2:NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU 2.1. Nội dung nghiên cứu