nấm gây bệnh héo rũ gốc mốc trắng (Sclerotium rolfsii) hại cà chua
Tiến hành thu mẫu cây bị bệnh còn tươi mới trên ựồng ruộng, mang về phòng thắ nghiệm ựể phân lập, giám ựịnh nguyên nhângây bệnh.
Các mẫu bệnh thu thập trong quá trình ựiều tra ựược phân lập và sử dụng làm nguồn nguyên liệu ựể tiến hành làm các thắ nghiệm xác ựịnh ựặc ựiểm sinh học, cũng như các thắ nghiệm trong phòng, trong nhà lướị
- Phương pháp phân lập, giám ựịnh nấm gây bệnh
Thu thập mẫu và phương pháp phân lập mẫu nấm gây bệnh
Phân lập: Chọn mẫu bệnh có triệu chứng ựặc trưng còn tươi mới của ựối tượng nghiên cứụ Mẫu bệnh ở các bộ phận của cây bị bệnh ựều ựược bảo quản ở nơi thoáng mát.
Khi phân lập, sử dụng các mô mới bị bệnh, rửa sạch bằng nước máy, rửa
lại bằng nước cất. Khử trùng bằng cồn 700C trong thời gian 10-15 giâỵ Sau
ựó thấm khô bằng giấy thấm vô trùng. đặt mẫu bệnh lên thớt, cắt thành lát mỏng kắch thước 2-3 mm rồi cấy lên môi trường WẠ Sau 2-3 ngày nấm mọc, cấy truyền sang môi trường PGẠ Tiếp tục cấy truyền 3-4 lần cho ựến khi
nấm thuần khiết và giữ nguồn ựể nghiên cứu trong tủ lạnh ở nhiệt ựộ 150C
Kỹ thuật cấy truyền: khử trùng que cấy bằng cồn 960 trên ngọn lửa ựèn
cồn, dùng que cấy ựể nguội cắt phần ựầu sợi nấm. đặt sang môi trường PGA ựã chuẩn bị, hơi ấn nhẹ ựể sợi nấm tiếp xúc với môi trường.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...18
Nghiên cứu ựặc ựiểm sinh học
- Ảnh hưởng của nhiệt ựộ:
Dùng nguồn nấm thuần khiết cấy lên môi trường PGA ựã chuẩn bị sẵn.
Sau ựó ựặt ở các ngưỡng nhiệt ựộ 15; 20; 25; 30; 350C.
- Ảnh hưởng của pH môi trường:
Dùng khoai tây rửa sạch ựể cả vỏ, cắt thành từng miếng nhỏ ựun sôi trong 15-20 phút, lọc lấy dịch chiết. Tiếp theo cho ựường glucose, agar vào
theo tiêu chuẩn, ựem hấp ở ựiều kiện 1210C (1,5 atm) trong 45 phút, ựể nguội
ựến 50-550C rồi chia ra ựĩa petrị Sau ựó ựổ ra cốc ựong khác nhau, ựem ựiều
chỉnh pH ở các mức pH5, 6, 7, 8 bằng dung dịch HCl, NaOH. Sử dụng giấy quỳ tắm và căn cứ vào bảng so màu ựể xác ựịnh mức pH cần ựọ Sau 2 ngày, dùng nấm thuần khiết cấy lên môi trường.
- Bố trắ thắ nghiệm: Tất cả các thắ nghiệm trong phòng ựược bố trắ theo phương pháp khối ngẫu nhiên ựầy ựủ RCB, với 4 lần nhắc lại cho mỗi công thức, mỗi lần nhắc lại là 1 hộp lồng petrị
- Chỉ tiêu theo dõi: đường kắnh tản nấm (cm), màu sắc và hình dạng tản nấm, thời gian hình thành hạch nấm, số lượng hạch nấm (ựối với những nấm có hình thành hạch)
3.2.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của giống cà chua ựến mức ựộ nhiễm bệnh lở cổ rễ và héo rũ gốc mốc trắng
để ựánh giá khả năng chống chịu ựối với bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng của các giống cà chua ựang trồng phổ biến ngoài sản xuất, chúng tôi tiến hành thắ nghiệm trên 5 giống cà chua trồng trong ựiều kiện nhà lưới:
CT1: Giống Magic
CT2: Giống Pháp lai T26 CT3: Giống Hà Lan 512 CT4: Giống 505 Hồng Kông CT5: Giống HT 160
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...19
- Vật liệu thắ nghiệm:
Giống cà chua ở giai ựoạn 3 lá thật đất thắ nghiệm ựã ựược hấp vô trùng
Nguồn bệnh ựã ựược nuôi cấy trên môi trường trấu cám (2 trấu:1cám)
- Thiết kế thắ nghiệm:
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp khối ngẫu nhiên ựầy ựủ (RCBD) với 4 lần nhắc lạị Số lượng cây cà chua của mỗi công thức là 15 câỵ
- Cách tiến hành:
đất sau khi ựã ựược hấp vô trùng, ựể nguội ựược trộn với nguồn bệnh ựược nuôi cấy trên môi trường trấu cám theo tỷ lệ: 10g giá thể có chứa nguồn bệnh: 1 kg ựất. Hỗn hợp này ựược cho vào túi bầu nilon ựen với lượng 2 kg. Cây cà chua ở giai ựoạn 3 lá thật ựược trồng vào bầụ Nước sạch ựược tưới ựể ựảm bảo ựủ ựộ ẩm của ựất cho cây bén rễ và sinh trưởng.
- Theo dõi thắ nghiệm:
Tiến hành theo dõi các chỉ tiêu: thời gian xuất hiện bệnh ựầu tiên sau khi trồng (ngày), xác ựịnh số cây bị bệnh và TLB% sau khi trồng 15 ngàỵ