Sclerotium rolfsii của dịch chiết từ củ gừng, hạt xoan và củ tỏi ở các nồng ựộ xử lý trên môi trường PGA
Thắ nghiệm 2 nhân tố ựược tiến hành với 3 loại dịch chiết (gừng, tỏi, xoan) và 5 mức nồng ựộ xử lý (5, 10, 15, 20, 25 g/100ml)
Bố trắ thắ nghiệm: thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp ô lớn ô nhỏ (Split-plot) với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức là một ựĩa petri có ựường kắnh 9mm.
Cách tiến hành:
Chuẩn bị dịch chiết: Củ gừng, hạt xoan và củ tỏi ựược sử dụng làm nguyên liệu chiết tách dịch chiết ựể thử nghiệm. đầu tiên, các nguyên liệu này ựược hong khô dưới nắng trong 7 ngày, sau ựó ựược nghiền thành bột. Cân
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...22
trọng lượng của bột nguyên liệu tương ứng với các công thức cho vào 100ml cồn ethanol và ngâm trong 24h. Sau ựó dung dịch này ựược lắc mạnh bằng tay trong 5 phút và lọc qua giấy lọc, tiếp theo ựược lọc qua màng lọc vi khuẩn (0,2ộm) ựể tránh nhiễm khuẩn.
Chuẩn bị môi trường nuôi cấy: Môi trường PGA ựược sử dụng làm môi
trường nuôi cấỵ Dung dịch PGA ựược hấp vô trùng ở nhiệt ựộ 1210C
(1,5atm) trong 40 phút. Sau khi dung dịch này ựược ựể nguội ựến nhiệt ựộ khoảng 550C, tiến hành chia dung dịch ra các ựĩa petri có ựường kắnh 9cm, sau ựó cho 1ml dung dịch dịch chiết ở các nồng ựộ theo vào từng công thức và quấy ựềụ Các ựĩa môi trường ựược ựặt trong tủ vô trùng và bật ựèn cực tắm trong 2 ngàỵ Sau ựó các ựĩa môi trường không bị khuẩn tạp sẽ ựược sử dụng ựể cấy nguồn nấm bệnh thuần.
Tiến hành ựo ựường kắnh tản nấm (cm) ở các công thức hàng ngày cho ựến khi tản nấm ở công thức ựối chứng phát triển kắn ựĩạ
% ức chế sự sinh trưởng của nấm bệnh ựược xác ựịnh theo công thức của Pandey et al (1982).
3.2.8. Nghiên cứu hiệu quả phòng trừ bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng hại cà chua của dịch chiết từ củ gừng, hạt xoan, củ tỏi ựược mốc trắng hại cà chua của dịch chiết từ củ gừng, hạt xoan, củ tỏi ựược chiết bằng các dung môi khác nhau
Thắ nghiệm 2 nhân tố với 3 loại nguyên liệu (củ gừng, hạt xoan, củ tỏi) x 2 phương pháp chiết (chiết bằng nước, chiết bằng cồn) ựược tiến hành trong ựiều kiện nhà lướị
Bố trắ thắ nghiệm: thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp ô lớn ô nhỏ (Split- plot) với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức là một ựĩa petri có ựường kắnh 9 cm..
Cách tiến hành:
Chuẩn bị dịch chiết:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...23
Chiết bằng dung môi là nước: Củ gừng, hạt xoan và củ tỏi ựược sử dụng làm nguyên liệu ựể chiết tách các dịch chiết ựể thử nghiệm. đầu tiên, các nguyên liệu này ựược hong khô dưới nắng trong 7 ngày, sau ựó ựược nghiền thành bột. Cho 25g bột nguyên liệu chiết vào 100ml nước lạnh, ựặt trong tủ
lạnh ở nhiệt ựộ 4oC trong 24h. Sau ựó dung dịch này ựược lắc mạnh bằng tay
trong 5 phút và lọc qua giấy lọc, tiếp theo ựược lọc qua màng lọc vi khuẩn (0,2ộm) ựể tránh nhiễm khuẩn.
Chuẩn bị môi trường nuôi cấy: Môi trường PGA ựược sử dụng làm môi
trường nuôi cấỵ Sau khi dung dịch PGA ựược hấp vô trùng ở nhiệt ựộ 1200C,
1,5atm trong 40 phút. Sau khi dung dịch này ựược ựể nguội ựến nhiệt ựộ khoảng 500C, tiến hành chia dung dịch ra các ựĩa petri có ựường kắnh 9cm, sau ựó cho 1ml dung dịch dịch chiết tương ứng với từng công thức và quấy ựềụ Các ựĩa môi trường ựược ựặt trong tủ vô trùng và bật ựèn cực tắm trong 2 ngàỵ Sau ựó các ựĩa môi trường không bị khuẩn tạp sẽ ựược sử dụng ựể cấy nguồn nấm bệnh thuần.
Tiến hành ựo ựường kắnh tản nấm ở các công thức hàng ngày cho ựến khi tản nấm ở công thức ựối chứng phát triển kắn ựĩạ
% ức chế sự sinh trưởng của nấm bệnh ựược xác ựịnh theo công thức của Pandey et al (1982)