bào tử của nấm Trichoderma viride
Thắ nghiệm ựược tiến hánh với 7 loại giá thể khác nhau: CT1: Giá thể trấu cám (2 trấu:1 cám)
CT2: Giá thể mùn cưa
CT3: Giá thể hạt thóc nếp lép + thóc nếp mẩy (3:1) CT4: Giá thể thân ngô
CT5: Giá thể lõi ngô
CT6: Giá thể vỏ quả ựậu tương
CT7: Giá thể hỗn hợp (1 trấu: 1 cám: 2 mùn cưa: 2 thóc nếp: 2 thân ngô: 2 vỏ quả ựậu tương)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...20
Tất cả các giá thể trên ựều ựược cân với trọng lượng 20 g, sau ựó ựem
hấp vô trùng ở nhiệt ựộ 1210C (1,5 atm) trong 45 phút, ựể nguội ựem cấy nấm
Trichoderma viridẹ Sau 6 ngày ựem xác ựịnh số lượng bào tử nấm T.
viride/1g giá thể nhân nuôị
Phương pháp xác ựịnh số lượng bào từ 1 g giá thể tiến hành theo phương pháp ựếm trực tiếp bằng buồng ựếm hồng cầu: Dùng 1g giá thể nhân nuôi hoà vào 100ml nước cất, sau ựó lấy 1ml dung dịch nhỏ vào lam ựếm hồng cầu, quan sát và ựếm số bào tử dưới kắnh hiển vị
3.2.5. Nghiên cứu khả năng ức chế khả năng sinh trưởng nấm
Rhizoctonia solani và nấm Sclerotium rolfsii của nấm ựối kháng
Trichoderma viride và Trichoderma harzianum
Thắ nghiệm ựược tiến hành trên môi trường PGA với 4 công thức: CT1: đối chứng (chỉ cấy nấm bệnh)
CT2: Nấm ựối kháng cấy ựồng thời với nấm bệnh CT3: Nấm ựối kháng cấy sau nấm bệnh 1 ngày CT4: Nấm ựối kháng cấy trước nấm bệnh 1 ngày
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp khối ngẫu nhiên ựầy ựủ RCBD với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức là một ựĩa Petri có ựường kắnh 10 cm
Tiến hành thắ nghiệm: Nấm ựối kháng và nấm bệnh ựược cấy trên môi trường PGA theo từng công thức thắ nghiệm, sau ựó ựặt trong tủ ựịnh ôn ở nhiệt ựộ 300C.
Theo dõi ựường kắnh tản nấm hàng ngày cho ựến khi tản nấm ở công thức ựối chứng phát triển kắn ựĩạ
Xác ựịnh % ức chế sự sinh trưởng của nấm bệnh
3.2.6. Nghiên cứu hiệu quả phòng trừ bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng cà chua của nấm ựối kháng Trichoderma viride mốc trắng cà chua của nấm ựối kháng Trichoderma viride
Thắ nghiệm trong ựiều kiện nhà lưới ựược tiến hành với 4 công thức: CT1: đối chứng (chỉ xử lý nấm bệnh)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...21
CT2: Xử lý nấm bệnh và nấm T. viride ựồng thời
CT3: Xử lý nấm bệnh trước khi xử lý nấm T. viride 1 ngày
CT4: Xử lý nấm T. viride trước khi xử lý nấm bệnh 1 ngày
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp khối ngẫu nhiên ựầy ựủ (RCBD) với 4 lần nhắc lại, mỗi công thức là 15 cây cà chua ở giai ựoạn 3 lá thật.
Phương pháp tiến hành:
Chuẩn bị nguồn nấm: Nấm bệnh và nấm T. viride ựược nuôi cấy trên môi
trường trấu cám (2 trấu:1cám), ựể ở nhiệt ựộ 300C trong thời gian 7 ngàỵ
Phương pháp lây bệnh và xử lý nấm T. viride: dùng môi trường trấu cám
có chứa nguồn bệnh hoặc nấm ựối kháng rải quanh gốc cây (phần tiếp giáp giữa phần thân và rễ) theo tỷ lệ 10g giá thể nấm bệnh: 10g giá thể nấm T.
viride: 1 kg ựất. Thời ựiểm lây nhiễm nấm bệnh và xử lý nấm T. viride ựược
tiến hành theo từng công thức. Sau khi xử lý xong, lấp một lớp ựất mỏng lên phắa trên, tưới ẩm ựều cho tất cả các công thức.
Xác ựịnh thời ựiểm cây xuất hiện bệnh sau khi lây nhiễm và số cây bị bệnh ở các công thức sau 15 ngày lây nhiễm.
độ hữu hiệu (đHH%) ựược xác ựịnh theo công thức Abbot
3.2.7. Nghiên cứu hiệu quả ức chế nấm Rhizoctonia solani và nấm
Sclerotium rolfsii của dịch chiết từ củ gừng, hạt xoan và củ tỏi ở các nồng ựộ xử lý trên môi trường PGA
Thắ nghiệm 2 nhân tố ựược tiến hành với 3 loại dịch chiết (gừng, tỏi, xoan) và 5 mức nồng ựộ xử lý (5, 10, 15, 20, 25 g/100ml)
Bố trắ thắ nghiệm: thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp ô lớn ô nhỏ (Split-plot) với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức là một ựĩa petri có ựường kắnh 9mm.
Cách tiến hành:
Chuẩn bị dịch chiết: Củ gừng, hạt xoan và củ tỏi ựược sử dụng làm nguyên liệu chiết tách dịch chiết ựể thử nghiệm. đầu tiên, các nguyên liệu này ựược hong khô dưới nắng trong 7 ngày, sau ựó ựược nghiền thành bột. Cân
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...22
trọng lượng của bột nguyên liệu tương ứng với các công thức cho vào 100ml cồn ethanol và ngâm trong 24h. Sau ựó dung dịch này ựược lắc mạnh bằng tay trong 5 phút và lọc qua giấy lọc, tiếp theo ựược lọc qua màng lọc vi khuẩn (0,2ộm) ựể tránh nhiễm khuẩn.
Chuẩn bị môi trường nuôi cấy: Môi trường PGA ựược sử dụng làm môi
trường nuôi cấỵ Dung dịch PGA ựược hấp vô trùng ở nhiệt ựộ 1210C
(1,5atm) trong 40 phút. Sau khi dung dịch này ựược ựể nguội ựến nhiệt ựộ khoảng 550C, tiến hành chia dung dịch ra các ựĩa petri có ựường kắnh 9cm, sau ựó cho 1ml dung dịch dịch chiết ở các nồng ựộ theo vào từng công thức và quấy ựềụ Các ựĩa môi trường ựược ựặt trong tủ vô trùng và bật ựèn cực tắm trong 2 ngàỵ Sau ựó các ựĩa môi trường không bị khuẩn tạp sẽ ựược sử dụng ựể cấy nguồn nấm bệnh thuần.
Tiến hành ựo ựường kắnh tản nấm (cm) ở các công thức hàng ngày cho ựến khi tản nấm ở công thức ựối chứng phát triển kắn ựĩạ
% ức chế sự sinh trưởng của nấm bệnh ựược xác ựịnh theo công thức của Pandey et al (1982).
3.2.8. Nghiên cứu hiệu quả phòng trừ bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng hại cà chua của dịch chiết từ củ gừng, hạt xoan, củ tỏi ựược mốc trắng hại cà chua của dịch chiết từ củ gừng, hạt xoan, củ tỏi ựược chiết bằng các dung môi khác nhau
Thắ nghiệm 2 nhân tố với 3 loại nguyên liệu (củ gừng, hạt xoan, củ tỏi) x 2 phương pháp chiết (chiết bằng nước, chiết bằng cồn) ựược tiến hành trong ựiều kiện nhà lướị
Bố trắ thắ nghiệm: thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp ô lớn ô nhỏ (Split- plot) với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức là một ựĩa petri có ựường kắnh 9 cm..
Cách tiến hành:
Chuẩn bị dịch chiết:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...23
Chiết bằng dung môi là nước: Củ gừng, hạt xoan và củ tỏi ựược sử dụng làm nguyên liệu ựể chiết tách các dịch chiết ựể thử nghiệm. đầu tiên, các nguyên liệu này ựược hong khô dưới nắng trong 7 ngày, sau ựó ựược nghiền thành bột. Cho 25g bột nguyên liệu chiết vào 100ml nước lạnh, ựặt trong tủ
lạnh ở nhiệt ựộ 4oC trong 24h. Sau ựó dung dịch này ựược lắc mạnh bằng tay
trong 5 phút và lọc qua giấy lọc, tiếp theo ựược lọc qua màng lọc vi khuẩn (0,2ộm) ựể tránh nhiễm khuẩn.
Chuẩn bị môi trường nuôi cấy: Môi trường PGA ựược sử dụng làm môi
trường nuôi cấỵ Sau khi dung dịch PGA ựược hấp vô trùng ở nhiệt ựộ 1200C,
1,5atm trong 40 phút. Sau khi dung dịch này ựược ựể nguội ựến nhiệt ựộ khoảng 500C, tiến hành chia dung dịch ra các ựĩa petri có ựường kắnh 9cm, sau ựó cho 1ml dung dịch dịch chiết tương ứng với từng công thức và quấy ựềụ Các ựĩa môi trường ựược ựặt trong tủ vô trùng và bật ựèn cực tắm trong 2 ngàỵ Sau ựó các ựĩa môi trường không bị khuẩn tạp sẽ ựược sử dụng ựể cấy nguồn nấm bệnh thuần.
Tiến hành ựo ựường kắnh tản nấm ở các công thức hàng ngày cho ựến khi tản nấm ở công thức ựối chứng phát triển kắn ựĩạ
% ức chế sự sinh trưởng của nấm bệnh ựược xác ựịnh theo công thức của Pandey et al (1982)
3.2.9. Ảnh hưởng của thời gian bảo quản dịch chiết gừng, tỏi, xoan ựến hiệu lực phòng trừ bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng cà chua hiệu lực phòng trừ bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng cà chua
Thắ nghiệm 2 nhân tố ựược tiến hành với 3 loại dịch chiết (gừng, xoan, tỏi) x 5 mức thời gian bảo quản dịch chiết (0, 15, 30, 45, 60 ngày).
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp ô lớn ô nhỏ (Split-plot) với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức là một ựĩa petri có ựường kắnh 9mm.
Phương pháp tiến hành:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...24
Môi trường nuôi cấy là PGA ựược xử lý dịch chiết tương ứng với từng công thức.
Theo dõi ựường kắnh tản nấm hàng ngày cho ựến khi nấm bệnh ở công thức ựối chứng mọc kắn ựĩạ Xác ựịnh% ức chế sinh trưởng của nấm bệnh theo công thức của Pandey et al (1982)
3.2.10. Hiệu quả phòng trừ bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng hại cà chua của dịch chiết từ củ gừng, hạt xoan, củ tỏi ở các phương pháp hại cà chua của dịch chiết từ củ gừng, hạt xoan, củ tỏi ở các phương pháp xử lý khác nhau
Thắ nghiệm 2 nhân tố ựược tiến hành với 3 loại dịch chiết (gừng, xoan, tỏi) x 2 phương pháp xử lý (xử lý hạt, xử lý vào ựất).
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp ô lớn ô nhỏ (split-plot) với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức gieo 30 hạt cà chua giống HT160. Thắ nghiệm có công thức ựối chứng (không xử lý dịch chiết).
Cách tiến hành:
Xử lý hạt cà chua bằng dịch chiết: Ngâm hạt cà chua vào dịch chiết tương ứng ở nồng ựộ 25g nguyên liệu/100ml nước trong thời gian trong thời 60 phút. Hạt ựược gieo vào trong khay ựã xử lý nấm bệnh vào ựất (10g giá thể trấu-cám: 1kg ựất), mỗi khay gieo 30 hạt cà chuạ
Xử lý dung dịch chiết từ tỏi, gừng, hạt xoan vào ựất: dung dịch chiết ựược phun vào trong ựất ựã xử lý nấm bệnh theo tỷ lệ 100ml dịch chiết/kg ựất. Sau ựó hạt cà chua ựược gieo trên khay ựất ựã ựược chuẩn bị với lượng 30 hạt/khay cho mỗi công thức.
Tiến hành xác ựịnh số cây bị nhiễm bệnh và TLB% sau 20 ngày gieọ
3.2.11. Ảnh hưởng của thời gian xử lý dịch chiết gừng, tỏi, xoan ựến bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng cà chua lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng cà chua
Thắ nghiệm 2 nhân tố ựược tiến hành với 3 loại dịch chiết (gừng, xoan, tỏi) x 3 thời ựiểm xử lý dịch chiết (Xử lý trước nấm bệnh 2 ngày; Xử lý cùng thời ựiểm xử lý nấm bệnh; Xử lý sau nấm bệnh 2 ngày).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...25
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp ô lớn ô nhỏ (split-plot) với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức trồng 30 cây cà chua, giống HT160 ở giai ựoạn 3 lá thật. Thắ nghiệm có công thức ựối chứng (không xử lý dịch chiết).
Cách tiến hành:
Phương pháp tiến hành:
Chuẩn bị nguồn nấm: Nấm bệnh ựược nuôi cấy trên môi trường trấu cám
(2 trấu:1cám), ựể ở nhiệt ựộ 300C trong thời gian 7 ngàỵ
Phương pháp lây bệnh: dùng môi trường trấu cám có chứa nguồn bệnh trộn với ựất theo tỷ lệ 10g giá thể nấm bệnh : 1 kg ựất. Thời ựiểm xâm nhiễm nấm bệnh ựược tiến hành theo từng công thức.
Xử lý dung dịch chiết từ tỏi, gừng, hạt xoan vào ựất: dung dịch chiết tương ứng với từng công thức ựược phun vào trong ựất theo tỷ lệ 100ml dịch chiết/kg ựất
Xác ựịnh thời ựiểm cây xuất hiện bệnh sau lây nhiễm và số cây bị bệnh ở các công thức sau 15 ngày lây nhiễm.
độ hữu hiệu (đHH%) ựược xác ựịnh theo công thức Abbot
3.2.12. Hiệu quả phòng trừ bệnh lở rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng hại cà chua của thuốc Nativo 750WG ở các nồng ựộ xử lý khác nhau cà chua của thuốc Nativo 750WG ở các nồng ựộ xử lý khác nhau
Thắ nghiệm trong ựiều kiện nhà lưới ựược tiến hành với 5 công thức: CT1: đối chứng (xử lý bằng nước lã)
CT2: Xử lý thuốc Nativo 750WG ở nồng ựộ 0,5g/l CT3: Xử lý thuốc Nativo 750WG ở nồng ựộ 1,0g/l CT4: Xử lý thuốc Nativo 750WG ở nồng ựộ 1,5g/l CT5: Xử lý thuốc Nativo 750WG ở nồng ựộ 2,0g/l
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp khối ngẫu nhiên ựầy ựủ (RCBD) với 4 lần nhắc lạị Mỗi lần nhắc lại của mỗi công thức có 15 cây cà chua, giống HT160 ở giai ựoạn 3 lá thật.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...26
đất trồng cà chua ựược hấp vô trùng và cho vào các bầu, mỗi bầu 2 kg ựất. Sau ựó trồng cây cà chua ở giai ựoạn 3 lá thật vào bầu (mỗi bầu 1 cây). Xếp các bầu theo khoảng cách 40X60 cm. Sau 7 ngày trồng, tiến hành xâm nhiễm nguồn bệnh bằng giá thể trấu-cám ựã có chứa nguồn bệnh vào trong lớp ựất mặt ở ựộ sâu 3cm xung quanh gốc. Xử lý thuốc ở các nồng ựộ khác nhau tương ứng với từng công thức. Mỗi công thức ở một lần nhắc lại phun với lượng nước là 100 ml phun ựều cho các câỵ
Theo dõi ngày phát bệnh ở các công thức, tắnh số cây bị bệnh sau 15 ngày xử lý và tắnh tỷ lệ bệnh (TLB%).
3.2.13. Hiệu quả phòng trừ bệnh lở rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng hại cà chua của thuốc Nativo 750WG ở các các phương thức xử lý khác nhau cà chua của thuốc Nativo 750WG ở các các phương thức xử lý khác nhau
Thắ nghiệm trong ựiều kiện nhà lưới ựược tiến hành với 4 công thức: CT1: ựối chứng (Xử lý bằng nước lã)
CT2: Xử lý hạt bằng thuốc nativo 750WG trước khi gieo
CT3: Xử lý ựất bằng thuốc nativo 750WG cùng thời ựiểm với gieo hạt CT4: Xử lý ựất bằng thuốc nativo 750WG sau khi hạt nảy mầm
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp khối ngẫu nhiên ựầy ựủ (RCBD) với 4 lần nhắc lạị Mỗi công thức ở một lần nhắc lại gieo 30 hạt cà chua giống HT160.
Cách tiến hành:
Chuẩn bị dung dịch thuốc Nativo 750WG: Tất cả các công thức ựều ựược xử lý thuốc Nativo ở nồng ựộ 1,5g/l.
Xử lý hạt bằng thuốc Nativo: Ngâm hạt cà chua vào dịch chiết tương ứng ở nồng ựộ 1,5g/l trong thời gian 60 phút. Hạt ựược gieo vào trong khay ựã xử lý nấm bệnh vào ựất (10g giá thể trấu-cám: 1kg ựất), mỗi khay gieo 30 hạt cà chuạ
Xử lý thuốc Nativo vào ựất: phun 100ml/công thức dung dịch thuốc Nativo ở nồng ựộ 1,5g/l vào trong ựất ựã xử lý nấm bệnh cùng thời ựiểm cùng lúc với gieo hạt (CT3), ở thời ựiểm số hạt nảy mầm >50% (CT4).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...27
3.2.14. So sánh hiệu quả phòng trừ bệnh lở cổ rễ và bệnh héo rũ gốc mốc trắng hại cà chua của dịch chiết thực vật, nấm ựối kháng và thuốc hoá trắng hại cà chua của dịch chiết thực vật, nấm ựối kháng và thuốc hoá học
Thắ nghiệm ựồng ruộng ựược tiến hành với 6 công thức: CT1: đối chứng (phun nước lã)
CT2: Xử lý bằng dịch chiết từ củ gừng (25g/l) CT3: Xử lý bằng dịch chiết từ hạt xoan (25g/l) CT4: Xử lý bằng dịch chiết từ củ tỏi (25g/l)
CT5: Xử lý bằng nấm Trichoderma viride
CT6: Xử lý bằng thuốc Nativo 750WG (1,5g/l)
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo phương pháp khối ngẫu nhiên ựầy ựủ với 3
lần nhắc lạị Diện tắch mỗi công thức cho 1 lần nhắc lại là 24 m2 (100 cây cà
chua).
Phương pháp tiến hành:
Ruộng thắ nghiệm ựược chia thành các ô theo sơ ựồ thắ nghiệm. Xâm nhiễm nấm bệnh vào ựất với lượng 10 g giá thể trấu-cám có chứa nguồn bệnh/m2, sau ựó xử lý dung dịch chiết từ gừng, tỏi, hạt xoan (nồng ựộ 25g/100ml), thuốc Nativo (1,5g/l) và nấm Trichoderma tương ứng với từng công thức với lượng nước phun 8l/360m2. 2 ngày sau khi xử lý tiến hành trồng cây cà chua con có 2-3 lá thật theo khoảng cách 40X60cm. Xác ựịnh số cây bị hại sau khi trồng 20 ngàỵ
+ Chỉ tiêu theo dõi: xác ựịnh tỷ lệ % cây bị bệnh (TLB%) và ựộ hữu hiệu (đHH%), thời gian xuất hiện bệnh sau trồng
Các chỉ tiêu theo dõi và phương pháp tắnh toán
1) % ức chế sinh trưởng của nấm bệnh thoe công thức của Pandey et al (1982)