M L1 L2 L3 L4 L
4.4.2.Khảo sỏt tớnh gõy bệnh của vi khuẩn R solanacearum trờn cỏc cõy ký chủ bằng phương phỏp sỏt thương rễ
chủ bằng phương phỏp sỏt thương rễ
Vi khuẩn R. solanacearum cú phổ ký chủ rất rộng, gõy bệnh trờn nhiều loài cõy trồng khỏc. Cỏc kết quả nghiờn cứu ủều khẳng ủịnh cỏc dũng vi khuẩn
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………71
phõn lập trờn cỏc cõy ký chủ khỏc nhau từ cỏc vựng khỏc nhau thỡ cú ủộc tớnh khỏc nhaụ Do bệnh hộo xanh vi khuẩn gõy hại trờn nhiều loài cõy trồng khỏc nhau nờn việc nghiờn cứu tớnh gõy bệnh của cỏc dũng vi khuẩn là cần thiết, nhằm xõy dựng cụng thức luõn canh phự hợp ủể phũng chống sự gõy hại của bệnh hộo xanh cú hiệu quả. Thớ nghiệm ủược chỳng tụi tiến hành trong chậu vại, mỗi cụng thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần 5 cõỵ Chỳng tụi chọn cỏc dũng vi khuẩn ủại diện cho cỏc cõy ký chủ khỏc nhaụ Phương phỏp ủược chỳng tụi sử dụng ủể lõy nhiễm là phương phỏp sỏt thương rễ.
Chỳng tụi chọn cỏc dũng vi khuẩn phõn lập ủược từ cỏc cõy trồng: CC3: cà chua Gia Viễn, Ninh Bỡnh
KT1: khoai tõy Tõn Lạc, Hũa Bỡnh TL: thuốc lỏ Ba Vỡ, Hà Tõy
L: lạc Ba Vỡ, Hà Tõy
CP: cà phỏo, Hưng Hà, Thỏi Bỡnh CC2: cà chua Kỳ Sơn, Hũa Bỡnh Mð: mướp ủắng Kim Bụi, Hũa Bỡnh
Lõy trờn 4 loài cõy trồng: 1: cà chua
2: khoai tõy 3: lạc
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………72
Bảng 4.19. Kết quả lõy nhiễm chộo của cỏc dũng vi khuẩn R. solanacearum trờn một số cõy trồng
Tỷ lệ nhiễm bệnh (%) Mẫu phõn lập
Cà chua Khoai tõy Lạc Thuốc lỏ
CC3 86,70 a 80,00 b 40,00 b 33,30 b TL 33,30 e 40,00 c 13,30 d 46,70 a KT1 73,30 b 100,00 a 20,00 c 26,70 c L 40,00 d 80,00 b 86,70 a 20,00 d CP 13,30 f 13,30 f 6,70 e 6,70 e CC2 46,70 c 33,30 d 13,30 d 20,00 d Mð 13,30 f 20,00 e 13,30 d 6,70 e ðối chứng 0,00 0,00 0,00 0,00
Bảng 4.20. Tớnh gõy bệnh của cỏc dũng vi khuẩn R. solanacearum trờn một số cõy ký chủ
Thời kỳ tiềm dục (ngày) Mẫu phõn lập
Cà chua Khoai tõy Lạc Thuốc lỏ
CC3 8 – 10 8 - 10 12 - 14 12 - 14 TL 10 - 12 10 - 12 12 - 15 10 - 12 KT1 8 - 10 6 - 8 12 - 14 12 - 14 L 8 - 10 8 - 10 6 - 8 12 - 15 CP 15 - 16 16 - 18 18 - 20 18 - 20 CC2 10 -12 10 - 12 12 - 15 12 - 15 Mð 14 - 15 12 - 15 12 - 15 14 - 16
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………73
Trong kết quả lõy nhiễm chộo của bảng 4.19 và bảng 4.20. Chỳng tụi nhận thấy rằng tất cả cỏc dũng vi khuẩn phõn lập ủược ủều biểu hiện triệu chứng trờn 4 loài cõy trồng chỳng tụi tiến hành thớ nghiệm, với tỷ lệ nhiễm bệnh khỏc nhau từ 6,70% ủến 100%. Tuỳ từng dũng vi khuẩn mà cú tỷ lệ phỏt bệnh trờn cỏc cõy trồng cú sự khỏc nhaụ Qua kết quả thu ủược, trong tất cả cỏc dũng vi khuẩn phõn lập ủược ủem lõy bệnh nhõn tạo thỡ dũng vi khuẩn phõn lập từ cỏc cõy cà chua, khoai tõy, lạc cú ủộc tớnh cao hơn so với cỏc dũng vi khuẩn ủược phõn lập từ mướp ủắng, cà phỏo (thời kỳ tiềm dục trung bỡnh tương ứng từ 6 – 8, 8 – 10 và 12 – 14 ngày). Dũng vi khuẩn ủược phõn lập từ cà phỏo cú ủộc tớnh thấp nhất (cú lỳc thời kỳ tiềm dục lờn tới 18 – 20 ngày khi lõy bệnh trờn thuốc lỏ, lạc), sau ủú ủến dũng vi khuẩn ủược phõn lập từ mướp ủắng.
Dũng vi khuẩn phõn lập trờn cà chua ở Gia Viễn (Ninh Bỡnh) gõy bệnh cao nhất trờn cà chua với tỷ lệ 86,70%, thời kỳ tiềm dục là 8 – 10 ngày; sau ủú ủến khoai tõy với tỷ lệ 80%; biểu hiện triệu chứng thấp nhất là trờn thuốc lỏ với tỷ lệ 33,30%, thời kỳ tiềm dục là 12 – 14 ngàỵ Dũng vi khuẩn phõn lập từ khoai tõy ở Tõn Lạc (Hũa Bỡnh) gõy bệnh cao nhất trờn khoai tõy và cà chua, trờn khoai tõy tỷ lệ nhiễm bệnh lờn tới 100%, thời kỳ tiềm dục là 6 – 8 ngày; trờn cà chua tỷ lệ nhiễm bệnh 73,30%. Dũng vi khuẩn phõn lập từ lạc biểu hiện ủộc tớnh cao nhất ở trờn lạc với tỷ lệ nhiễm bệnh 86,70%, thời kỳ tiềm dục 6 – 8 ngày, sau ủú ủến khoai tõy (80%) và cà chua (40%). Dũng vi khuẩn ủược phõn lập từ mướp ủắng cú tớnh gõy bệnh thấp trờn cỏc cõy ký chủ. Dũng vi khuẩn phõn lập từ thuốc lỏ gõy bệnh trờn cỏc cõy trồng với tỷ lệ thấp mặc dự cú thời kỳ tiềm dục trung bỡnh 10 – 12 ngày, tỷ lệ gõy bệnh cao nhất trờn thuốc lỏ (46,70%), sau ủú ủến khoai tõy (40%) và cà chua (33,30%). Như vậy, kết quả lõy nhiễm chộo cũng phự hợp
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………74
với cỏc cụng bố về bệnh hộo xanh vi khuẩn từ trước cho ủến naỵ Cỏc dũng vi khuẩn gõy bệnh hộo xanh trờn cỏc cõy trồng khỏc nhau từ cỏc vựng sinh thỏi khỏc nhau thỡ cú tớnh ủộc khỏc nhaụ Kết quả lõy nhiễm chộo cũng cho kết quả loài vi khuẩn R. solanacearum cú phổ ký chủ rất rộng và gõy hại ở rất nhiều vựng sinh thỏi khỏc nhaụ
Ảnh 4.7. Nhà lưới gieo cõy phục vụ cho cụng việc lõy bệnh nhõn tạo
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………75 a b
Ảnh 4.8. Triệu chứng hộo xanh biểu hiện trờn cõy trồng sau khi lõy bệnh nhõn tạo ạ trờn khoai tõy b. trờn lạc
Ảnh 4.9. Phản ứng siờu nhạy của cõy biểu hiện trờn cõy thuốc lỏ sau khi tiờm chủng vi khuẩn 48 giờ
Ảnh 4.10. Triệu chứng hộo xanh vi khuẩn trờn ớt
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………76 5. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ
5.1. Kết luận (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Từ những kết quả nghiờn cứu, chỳng tụi rỳt ra một số kết luận sau:
- Theo kết quả ủiều tra tỡnh hỡnh bệnh hộo xanh vi khuẩn gõy hại trờn một số cõy trồng thuộc vựng Hà Nội và phụ cận vụ hố thu 2007 và vụ xuõn hố 2008. Bệnh hộo xanh vi khuẩn (R. solanacearum) là một trong những loại bệnh hại phổ biến trờn cỏc cõy trồng cạn tại vựng Hà Nội và phụ cận.
- Bệnh xuất hiện, gõy hại trờn cỏc giai ủoạn sinh trưởng của cõy trồng. Bệnh gõy hại mạnh và phổ biến nhất là giai ủoạn cõy bắt ủầu ra hoa cho ủến thu quả lần 1, sau ủú sự gõy hại của vi khuẩn giảm dần khi cõy trồng bước vào giai ủoạn cuối của thời kỳ sinh trưởng.
- Qua kết quả ủiều tra bệnh hộo xanh vi khuẩn gõy hại trờn cỏc giống cà chua tại 3 vựng sản xuất rau (vựng sản xuất rau tự nhiờn, vựng sản xuất rau an toàn cú nhà lưới và vựng sản xuất rau an toàn khụng cú nhà lưới) chỳng tụi nhận thấy: việc sử dụng giống khỏng và ỏp dụng cỏc biện phỏp canh tỏc cú tỏc dụng hạn chế sự gõy hại của bệnh hộo xanh vi khuẩn.
- Cơ cấu luõn canh cõy trồng ảnh hưởng rất lớn ủến sự phỏt sinh phỏt triển của bệnh hộo xanh vi khuẩn. ðặc biệt cơ cấu luõn canh giữa cõy trồng cạn với lỳa nước hoặc với những cõy trồng khụng phải là ký chủ của vi khuẩn R. solanacearum ủược coi là biện phỏp hữu hiệu trong việc hạn chế tỏc hại của bệnh.
- Cỏc dũng vi khuẩn ủược phõn lập trờn cỏc cõy trồng tại vựng Hà Nội và phụ cận ủều phỏt triển tốt trờn 2 mụi trường TZC và SPA sau 72 giờ nuụi cấỵ
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………77
- Trờn mụi trường TZC, khuẩn lạc của cỏc dũng vi khuẩn ủều cú ủặc ủiểm chung: khuẩn lạc nhày, hỡnh dạng khụng ủều hoặc trũn, rỡa khuẩn lạc màu trắng, tõm khuẩn lạc cú màu phớt hồng.
- Trờn mụi trường SPA, khuẩn lạc của cỏc dũng vi khuẩn ủều cú dạng trũn, nhẵn, búng, mọc lồi trờn bề mặt mụi trường. Tuy nhiờn, màu sắc khuẩn lạc giữa cỏc dũng vi khuẩn cú sự khỏc nhau: khuẩn lạc của dũng vi khuẩn phõn lập trờn cà chua cú màu trắng kem; khuẩn lạc của cỏc dũng vi khuẩn phõn lập từ cà phỏo, lạc, thuốc lỏ, ớt thỡ cú màu trắng sữa; khuẩn lạc của dũng vi khuẩn phõn lập từ mướp ủắng, khoai tõy thỡ cú màu trắng trong.
- Cỏc dũng vi khuẩn gõy bệnh hộo xanh ủều phỏt triển tốt ở cỏc ngưỡng nhiệt ủộ từ 20 – 350C, nhưng phỏt triển tốt nhất từ ngưỡng nhiệt ủộ 25 – 300C.
- Kết quả kiểm tra biovar của 12 dũng vi khuẩn ủược phõp lập từ cỏc cõy trồng. Trong ủú, cú 8 dũng vi khuẩn thuộc biovar 3 và 4 dũng vi khuẩn chưa xỏc ủịnh ủược thuộc biovar nàọ
- Cú thể sử dụng cặp mồi DIV1F/DIV1R, phương phỏp chiết DNA bằng hoỏ chất CTAB 2% trong chẩn ủoỏn vi khuẩn gõy bệnh hộo xanh trờn một số cõy trồng cạn thuộc vựng Hà Nội và phụ cận.
- Cỏc dũng vi khuẩn ủược phõn lập trờn một số cõy trồng tại vựng Hà Nội và phụ cận ủều gõy bệnh trờn cà chua, thuốc lỏ, khoai tõy, lạc. Trong ủú cú 3 dũng vi khuẩn là CC3, KT1, L cú ủộc tớnh cao nhất; cỏc dũng vi khuẩn cũn lại cú ủộc tớnh thấp hơn.
5.2. ðề nghị
Trong quỏ trỡnh thực hiện ủề tài, chỳng tụi nhận thấy cần phải tiến hành nghiờn cứu sõu hơn nữa loài vi khuẩn R. solanacearum, ủể cú biện phỏp phũng trừ bệnh do vi khuẩn gõy nờn. Vậy, chỳng tụi ủề nghị:
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………78
- Tiếp tục nghiờn cứu sõu hơn về loài vi khuẩn gõy bệnh hộo xanh như khả năng tồn tại trong ủất, trong tàn dư thực vật, trong nước, hạt giống,...
- Tiếp tục sử dụng kỹ thuật PCR ủể xỏc ủịnh tớnh ủa dạng của loài vi khuẩn Ralstonia solanacearum gõy hại trờn cõy trồng cạn tại vựng Hà Nội và phụ cận.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………79