Bất cứ một tỏc nhõn nào muốn xõm nhập vào cơ thể thỡ phải qua hàng rào bảo vệ cơ thể hay ủú chớnh là hệ thống miễn dịch khụng ủặc hiệu.
Gia cầm cú cơ chế phũng chống tự nhiờn rất phỏt triển. Hệ thống miễn dịch khụng ủặc hiệu bao gồm: Da, niờm mạc, dịch tiết cỏc tuyến, gan, lỏch, thận, mảng payer, phản ứng viờm, tế bào thực bào, cỏc khỏng thể tự nhiờn khụng ủặc hiệu (bổ thể, propecdin, lyzozim, và opsonin).
2.8.2. Miễn dịch ủặc hiệu
Cũng như cỏc bệnh truyền nhiễm khỏc miễn dịch chống bệnh cỳm gia cầm gồm nhiều loại nhưng chỳng tụi chỉ xin ủề cập miễn dịch ủặc hiệu tiếp thu chủủộng và tiếp thu bịủộng - ủõy là hai loại miễn dịch ủúng vai trũ chủủạo.
Miễn dịch bịủộng
Ở gia cầm non hệ thống miễn dịch chưa phỏt triển hoàn thiện vỡ vậy ngay từ lỳc sơ sinh cơ thể của chỳng hoàn toàn khụng cú khả năng chống lại tỏc nhõn gõy bệnh một cỏch chủ ủộng và ủặc hiệu. Trạng thỏi miễn dịch ủặc hiệu chỉ cú thể cú ủược khi cơ thể gia cầm mẹ cú miễn dịch và truyền khỏng thểủặc hiệu cho con non qua lũng ủỏ trứng. đõy là khỏng thể thụủộng, là cơ
sở tạo nờn miễn dịch thụủộng ở gia cầm con. Ở gia cầm con 1 ngày tuổi trong mỏu cú khỏng thể cỳm gia cầm khỏng thể này khụng tự bản thõn gia cầm con sinh ra mà chỳng ủược thừa hưởng từ gia cầm mẹ cú miễn dịch truyền qua
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ...27
lũng ủỏ trứng. Khỏng thể thụủộng thuộc lớp IgY, ở gia cầm cú miễn dịch lớp khỏng thể này ủược truyền theo ủường mỏu tới ống dẫn trứng, qua lớp biểu mụ ủi vào tỳi lũng ủỏ của quả trứng trong giai ủoạn ủang hỡnh thành. đến ngày thứ 11 sau khi ấp phụi ủó phỏt triển, khỏng thể từ lũng ủỏ trứng qua nội bỡ vào mỏu của gia cầm con và tồn tại trong một thời gian.
Lượng khỏng thể thụ ủộng trong huyết thanh gia cầm con cú liờn quan
ủến khỏng thể cú trong lũng ủỏ trứng và trong huyết thanh của gia cầm mẹ. Ở
gia cầm mẹ lượng khỏng thể cú trong huyết thanh cao hơn một ớt so với lượng khỏng thể cú trong lũng ủỏ trứng. Người ta cú thể sử dụng khỏng thể trong lũng ủỏ trứng ủể thay thế cho khỏng thể cú trong huyết thanh. Trong huyết thanh gia cầm con cú lượng khỏng thể thụ ủộng thấp hơn so với lượng khỏng thể của gia cầm mẹ và trong lũng ủỏ trứng. Khỏng thể này cú xu hướng giảm dần cứ sau 4-5 ngày lượng khỏng thể lai giảm ủi một nửa, thời gian tồn tại ngắn từ 15-24 ngày, tuy thời gian tồn tại ngắn nhưng cú khả năng bảo hộ cho gia cầm trong những ngày tuổi ủầu. Tuy vậy, khi dựng vacxin lần ủầu tạo miễn dịch chủ ủộng cho gia cầm thỡ khỏng thể thụ ủộng sẽ trung hoà một lượng virus vacxin.
Miễn dịch chủủộng
Miễn dịch chủ ủộng ủối với bệnh cỳm gia cầm là loại miễn dịch thu
ủược sau khi gia cầm mắc bệnh khỏi hoặc sau khi làm vacxin. Vacxin sau khi vào cơ thể ủược ủưa ủến cỏc cơ quan cú thẩm quyền miễn dịch như: hạch, lỏch, tổ chức lympho dưới niờm mạc kớch thớch sản sinh ra cỏc khỏng thểủặc hiệu (khỏng thể dịch thể và khỏng thể tế bào).
Trong quỏ trỡnh sử dụng vacxin, khả năng tạo miễn dịch chủủộng của
ủàn gia cầm chịu ảnh hưởng của nhiều yếu tố như khỏng thể thụ ủộng, lượng khỏng nguyờn khi sử dụng, yếu tố dinh dưỡng ...
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ...28
mũi 2 ở gia cầm.
Vacxin cú thể giảm sự nghiờm trọng của bệnh và sự lan truyền của virus trong thực tế, nhưng virus cú thể sẽ khụng bị loại hoàn toàn khỏi ủàn gia cầm (Alexander et al 1996) [30]
2.8.3. Một số phương phỏp ủỏnh giỏ ủỏp ứng miễn dịch cỳm gia cầm
Mức ủộ ủỏp ứng miễn dịch cỳm của gia cầm cú thể ủược ủỏnh giỏ bằng phương phỏp huyết thanh học và cụng cường ủộc.
Khả năng bảo hộ của cơ thể chống virus cường ủộc cú mối tương quan với hiệu giỏ khỏng thể, cú thể sử dụng phản ứng huyết thanh học ủể ủỏnh giỏ mức ủộ ủỏp ứng miễn dịch của gia cầm như phản ứng AGID, phản ứng ELISA và phản ứng HI.
Trong ủú phản ứng HI ủược sử dụng rộng rói trong cỏc phũng thớ nghiệm, phương phỏp cụng cường ủộc ủược sử dụng với mục ủớch xỏc ủịnh mức ủộ ủỏp ứng miễn dịch của cơ thể sau khi sử dụng vacxin. Phương phỏp cụng cường ủộc ủỏnh giỏ ủỳng mức ủộ bảo hộ của ủàn gia cầm nhưng do một số khú khăn, ủặc biệt là vấn ủề dịch bệnh nờn khụng phải lỳc nào phương phỏp này cũng ủược sử dụng (Bell, 1991) [31]
2.9. Vacxin
2.9.1. Sự cần thiết của tiờm vacxin phũng bệnh cỳm gia cầm.
Trong thực tế sản xuất, cú nhiều nguyờn nhõn khỏc nhau làm cho cỏc biện phỏp an toàn sinh học khụng ủủ mạnh ủể khống chế sự lõy lan của cỏc chủng virus ủộc lực cao hoặc xuất hiện kẽ hở nào ủú mà bệnh cú nguy cơ xõm nhập vào ủàn gõy bệnh. Do ủú việc sử dụng vacxin là một giải phỏp cú ớch làm giảm thiệt hại kinh tế và gúp phần khống chế bệnh cú hiệu quả.
Quan ủiểm OIE: Sử dụng vacxin trong phũng bệnh cỳm gia cầm thể ủộc lực cao là biện phỏp hỗ trợ song song với cỏc biện phỏp tổng hợp khỏc như tiờu huỷ gia cầm bị nhiễm bệnh, an toàn sinh học, kiểm soỏt vận chuyển
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ...29
và theo OIE sử dụng vacxin là dập dịch, hạn chế thiệt hại trực tiếp hạn chế sự
lõy lan của virus.
Cuộc họp liờn ngành của OIE, FAO, WHO tại Rome thỏng 2 năm 2004
ủó chỉ ra ủối với cỳm gia cầm việc sử dụng vacxin như một giải phỏp, một cụng cụ tớch cực ủể ngăn chặn, khống chế và tiến ủến thanh toỏn bệnh cỳm gia cầm ở vựng bảo vệ. Vacxin nờn ủược sử dụng thành một chiến lược toàn diện phũng chống dịch cỳm gia cầm, bao gồm năm cụng ủoạn là: An toàn sinh học, năng cao nhận thức của người dõn, giỏm sỏt và chẩn ủoỏn, loại bỏ
gia cầm bị nhiễm virus và sử dụng vacxin.
Quan ủiểm của Trung Quốc: Trung Quốc tuõn thủ cỏc nguyờn tắc phũng chống dịch cỳm gia cầm của OIE khi dịch nổ ra. Trung Quốc cũn cho việc sử dụng vacxin nhằm mục ủớch phũng bệnh. điều ủú xuất phỏt từ cơ sở
Trung Quốc là nước cú lượng thuỷ cầm chiếm ủại ủa số trờn thế giới, do vậy nếu tiờu huỷ cỏc ủàn gia cầm cú khỏng thể khỏng lại virus cỳm gia cầm thỡ thiệt hại sẽ rất lớn. Trung Quốc sử dụng cỏc biện phỏp ủồng bộ song song với việc sử dụng vacxin trong toàn quốc nhằm khống chế cỏc ổ dịch xảy ra và phũng lõy lan từ nước ngoài, từủịa phương cú dịch sang ủịa phương khỏc.
Theo Ilaria Capua và Stefano Marangon (2004) [47], một số vacxin phũng bệnh cỳm gia cầm hiện nay:
Phũng hộ bệnh cỳm gia cầm là kết quả của ủỏp ứng miễn dịch chống lại protein Haemaglutinin (HA) mà hiện nay ủó xỏc ủịnh ủược 16 subtýp khỏc nhau từ H1-H16 và ở mức ủộ nào ủú chống lại protein Neuraminidae (NA) mà ủó xỏc ủịnh ủược 9 subtýp từ N1-N9. Cỏc ủỏp ứng miễn dịch khỏng lại protein bờn trong như Nucleoprotein (NP) và protein Matrix (M) của virus ủó
ủược chứng minh là khụng ủủủể tạo phũng hộ trờn thực ủịa. Vỡ vậy khụng cú 1 vacxin nào chung cho tất cả cỏc virus cỳm gia cầm. Trong thực tế sự phũng hộủược tạo ra nhờ cỏc subtýp Haemaglutinin cú trong vacxin.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ...30
2.9.2 Vacxin vụ hoạt ủồng chủng:
Ban ủầu ủược sản xuất như cỏc vacxin tự phỏt (autogenous), nghĩa là vacxin chứa cựng những virus cỳm giống như chủng gõy bệnh trờn thực ủịa. Loại vacxin này ủược sử dụng rộng rói ở Mehico và Pakistan. Một trong những vacxin thuộc loại này ủang ủược sử dụng hiện nay là của Aventis Pasteur, Nobilis và Weike Harbin. Nhược ủiểm của vacxin này là khụng phõn biệt gia cầm ủược tiờm chủng với gia cầm nhiễm virus thực ủịa qua kiểm tra khỏng thể.
2.9.3 Vacxin vụ hoạt dị chủng:
Vacxin này ủược sản xuất tương tự như vacxin vụ hoạt ủồng chủng.
điểm khỏc biệt là chủng virus sử dụng trong vacxin cú khỏng nguyờn H giống chủng virus trờn thực ủịa cũn khỏng nguyờn N dị chủng. Khi nhiễm virus trờn thực ủịa bảo hộ lõm sàng và giảm thải trừ virus ra ngoài mụi trường ủược ủảm bảo bằng phản ứng miễn dịch sản sinh bởi khỏng nguyờn nhúm H ủồng chủng, trong khi khỏng thể chống N sản sinh bởi virus thực ủịa cú thể sử dụng như chất ủỏnh dấu sự lõy nhiễm trờn thực ủịa. Vacxin dị chủng mức ủộ bảo hộ
khụng tỉ lệ chặt chẽ với mức ủộ ủồng chủng giữa gen ngưng kết tố hồng cầu trong vacxin và chủng trờn thực ủịa. đõy là một ưu ủiểm lớn cho phộp thành lập ngõn hàng vacxin bởi vỡ giống gốc khụng chứa virus cú mặt trờn thực ủịa.
Loại vacxin này ủược sử dụng rộng rói ở Trung Quốc, một số nước chõu Mỹ, chõu Âu. Ở Việt Nam hiện nay ủang sử dụng vacxin cỳm vụ hoạt dị
chủng với chủng H5N2 và vacxin cỳm vụ hoạt ủồng chủng với chủng H5N1 nhập từ Trung Quốc, Hà Lan.
2.9.4 Vacxin tỏi tổ hợp:
để kịp thời cú vacxin tiờm chủng phũng bệnh cho vật nuụi thỡ chiến lược sản xuất vacxin virus tỏi tổ hợp là một phương thức hiệu quả: một vài loại vacxin tỏi tổ hợp như virus ủậu gà chứa khỏng nguyờn H5, H7 ủó ủược sử
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ...31
dụng, ở ủõy virus ủậu gà ủược sử dụng như một vecter dẫn truyền, ngoài ra người ta cũng ủó sử dụng virus viờm thanh khớ quản truyền nhiễm làm vecter dẫn truyền.
Bằng cụng nghệ di truyền ngược (reverse genetics), vacxin ủược tạo ra theo hệ thống 8 plasmid (rescue plasmid system) mà nhúm tỏc giả Hoffmann và cộng sự thực hiện năm 2002. Hai plasmid mang gene HA và NA bắt nguồn từ chủng virus A/Vietnam/1203/04 (H5N1) mà Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) khuyến cỏo dựng làm vacxin. Và cỏc gene cũn lại (M, NS, NP, PA, PB1 và PB2) từ chủng virus cỳm A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). Gene HA ủược biến
ủổi di truyền ủể làm giảm tớnh ủộc lực của virus cỳm bằng cỏch cắt bỏ ba acid amin Arginine (R), 1 acid amin Lysine (K) và thay thế 1 acid amin Lysine (K) bằng 1 acid amin Threonine (T), ở vị trớ 327-328, vị trớ phõn cắt HA1 và HA2 của gene HA, vị trớ gúp phần tớnh ủộc lực cao của virus cỳm. Biến nạp 2 plasmid mang gene HA và NA từ chủng A/Vietnam/1203/04 (H5N1) và 6 plasmid mang cỏc gene cũn lại (M, NS, NP, PA, PB1 và PB2) từ chủng virus cỳm A/Puerto Rico/8/34 (H5N1) vào tế bào nuụi cấy (phụi trứng gà, hoặc tế
bào Vero, tế bào MDCK,Ầ). Virus tỏi tổ hợp này sẽ cú ủặc ủiểm khỏng nguyờn bề mặt giống với chủng hoang dại A/Vietnam/1203/04 (H5N1). Sau
ủú chọn lọc dũng virus tỏi tổ hợp này làm vacxin phũng cỳm H5N1. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Cỏc nhà khoa học thuộc Viện nghiờn cứu Cỏp Nhĩ Tõn ủó sản xuất thành cụng vacxin tỏi tổ hợp phũng chống cỳm gia cầm và Niucatxơn, vacxin cú thể dựng theo ủường tiờm, ủường miệng, ủường mũi hoặc theo phương phỏp khớ dung. đến cuối thỏng 12/2005 Trung Quốc ủó sản xuất ủược một tỉ
liều (Trớch theo Tụ Long Thành, 2005) [26]. Sử dụng vacxin tỏi tổ hợp cú vecter dẫn truyền cho phộp phõn biệt ủược con vật nhiễm bệnh tự nhiờn và con vật ủược tiờm chủng.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ...32
Nhĩ Kỳ, khỏng thểủược thu thập từ những bệnh nhõn mắc cỳm gia cầm. Việc sản xuất khỏng thể này mục ủớch giỳp cỏc bệnh nhõn mắc bệnh cỳm gia cầm nhanh phục hồi sức khỏe (Tụ Long Thành, 2006) [27].
Lịch sử sản xuất vacxin cỳm trờn người cho thấy ủó cú nhiều nỗ lực ủể
tỡm ra loại vacxin ủặc hiệu. Cỏc vacxin ủó từng ủược nghiờn cứu và thử
nghiệm gồm vacxin bất hoạt và vacxin sống. Cỏc nghiờn cứu từ trước tới nay cho thấy vacxin bất hoạt khụng hiệu quả bằng vacxin sống. Vacxin sống thường khụng chỉ mang lại khả năng miễn nhiễm mà cũn giỳp bảo vệ cơ thể
tốt hơn khi bị virus tấn cụng và thường chỉ cần vacxin một lần. Trong cỏc loại vacxin sống từng ủược thử nghiệm cú một số loại như vacxin khoảng cỏch tiến húa (host range vacxin) trong ủú cỏc RNA mó húa cho HA và NA ở người
ủược tỏi tổ hợp với sỏu ủoạn RNA cũn lại của chim ủể tạo ra loại virus nhược
ủộc khụng cú khả năng nhõn lờn hiệu quả ở người. Tuy nhiờn một ý tưởng sỏng tạo ủó giỳp tạo ra loại vacxin sống tốt hơn, ủú chớnh là vacxin nhạy nhiệt và thớch nghi ủiều kiện lạnh (temperature sensitive and cold adapted). Virus cỳm thớch nghi với ủiều kiện lạnh chỉ cú khả năng nhõn lờn ở họng của người (thớch nghi lạnh) và sẽ khụng gõy cỏc biến chứng khỏc bởi chỳng nhõn lờn rất kộm trong ủiều kiện nhiệt ủộ cao (nhạy nhiệt). để tạo ra loại vacxin này người ta từng dựng virus hiến (master virus), tức loại virus ủó ủược nuụi nhiều ủời trong ủiều kiện lạnh, cho nhiễm vào tế bào cựng với cỏc loại virus cỳm ủược dự ủoỏn sẽ xuất hiện, sau ủú sử dụng cỏc ủiều kiện chọn lọc ủể
chọn ra cỏc virus tỏi tổ hợp mang cỏc ủột biến thớch nghi lạnh và nhạy cảm nhiệt nhưng lại cú khỏng nguyờn của cỏc virus hiện hành. Khoảng mười năm trở lại ủõy, với cụng cụ di truyền học hiện ủại, người ta cú thể tạo ra cỏc vector tỏi tổ hợp chứa 6 ủoạn RNA của chủng virus hiến và 2 ủoạn RNA mó húa cho HA và NA của cỏc chủng ủang gõy bệnh ủể tạo ra chủng tỏi tổ hợp. Cụng nghệ Ộdi truyền ngượcỢ (reverse genetics) này ủó ủược sử dụng ủể tạo
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ...33
ra vacxin cỳm phun mũi Flumist ở Mỹ, ủược FDA thụng qua vào năm 2003. Nú cũng ủó ủược chuyển giao cho nhiều nước ủang phỏt triển. Tuy nhiờn với
ủặc thự của cỏc nước ủang phỏt triển, cú lẽ vacxin cỳm sẽ khụng ủược sản xuất ủại trà chừng nào nguy cơủại dịch chưa ủến gần bởi lẽ so với nhiều bệnh dịch khỏc thỡ cỳm vẫn ủược xem là ỘnhẹỢ.
Nghiờn cứu của nhúm tỏc giả Singapo và Mỹ kết luận rằng khỏng thể
thụ ủộng cú thể cung cấp chiến lược cả phũng và trị bệnh cỳm gia cầm (Brendon et al, 2006) [35].
Một nhúm cỏc nhà nghiờn cứu của Mỹ và Thổ Nhĩ Kỳ về cụng nghệ
sinh học ủó thành lập thư viện khỏng thể chống cỳm gia cầm (H5N1) mục
ủớch ủiều trị cho người mắc bệnh và hướng tới việc tiờm phũng chống dịch