L ỜI CAM ð OAN
4. ðố it ượng và phạm vi nghiên cứu của ñề tài
2.3.5. Phương pháp xác ñị nh ñộ an toàn sinh học của các chủng vi sinh vật
ñối kháng
Theo hướng dẫn số 90/679/EWG ngày 26 tháng 11 năm 1990 của Cộng
ñồng châu Âu, vi sinh vật thuộc ñộ nguy hiểm cấp 1 là các vi sinh vật không có khả năng gây bệnh ñối với người và ñộng vật. Vi sinh vật thuộc nhóm 2 là các vi sinh vật có thể có nguy cơ gây bệnh, song tùy thuộc vào loài cụ thể và có thể phòng tránh ñược (dẫn theo Phạm Văn Toản) [26], (Biological fertilizer technology, Internationnal Training course, Baodinh, China 2003).
- Phương pháp ñánh giá ñộc tính của chủng vi khuẩn sử dụng trên chuột bạch
Phương pháp ñánh giá ñộc tính của vi khuẩn ñối kháng trên chuột bạch: theo phương pháp LD50 oral (liều gây chết trung bình 50 % cá thể chuột khi thuốc xâm nhập qua ñường miệng) của NIAST, 2003. Chuột bạch có trọng lượng 18 g/con ñược nuôi ổn ñịnh trong 3 ngày, sau ñó phân thành các công thức tương ứng với số lượng chủng vi khuẩn ñối kháng thí nghiệm và chủng
B. subtilis trong men tiêu hóalàm ñối chứng dương, mỗi chủng vi khuẩn kiểm
ñịnh ñược tiến hành trên 15 con và chia thành 3 lô, mỗi lô ñược bố trí ăn thức
ăn ñã ñược trộn với dịch vi khuẩn ñối kháng tương ứng với các nồng ñộ 2.107; 2.108 và 2.109 tb/g thức ăn. Theo dõi các triệu chứng bất thường của chuột trong vòng 24 giờ ñểñánh giá mức ñộ gây ñộc cấp tính và theo dõi khả năng gây ñộc bán trường diễn trong 30 ngày của các chủng vi khuẩn ñối kháng. Nếu có chuột chết thì mổ ra quan sát tổng thể phủ tạng, tính tỷ lệ chuột chết và xác ñịnh LD50 theo công thức Karber-Behrens :
LD50 = Df - Sab/n
Df : Liều làm chết 100% súc vật.
b : Hiệu số giữa 2 liều kế tiếp.
n : Số súc vật chết ở mỗi liều hoặc số trung bình các lô.