4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.3.Ảnh hưởng của nguồn mẫu cấy ñế n khả năng chuyển gen của vi khuẩn
khuẩn Agrobacterium tumefasciens
ðể nghiên cứu ảnh hưởng của dạng mẫu cấy chúng tôi tiến hành thí nghiệm gồm 3 dạng mẫu gồm callus, tiền chồi và ñỉnh sinh trưởng cùng với
ñối chứng không lây nhiễm vi khuẩn của chúng, 3 loại mẫu sử dụng ñều không gây ảnh hưởng ñến sự phát triển của vi khuẩn, 100% mẫu ñều mọc khuẩn và khuẩn lạc mọc ñều ở tất cả các công thức có lây nhiễm vi khuẩn. Do vectơ sử dụng trong thí nghiệm có mang gen Bar kháng PPT, một hoạt chất chính trong thuốc trừ cỏ có nguồn gốc từ vi khuẩn Streptomyces hygroscopicus. PPT ức chế enzym tổng hợp glutamine dẫn ñến sự tích luỹ
ammoniac trong tế bào làm cây nhanh chết. Gen Bar kháng PPT, mã hoá cho enzym Phosphinthricin acetyltransferase, biến ñổi PPT từ dạng ức chế sinh tổng hợp glutamin sang dạng bị acetyl hoá không còn gây ñộc cho cây.
Khi chuyển các mẫu sang môi trường có chứa PPT thì các mô, tế bào không
ñược chuyển gen Bar thì sẽ bị chết còn những mô ñược chuyển gen sẽ tiếp tục sống và tái sinh. Vì thế chúng tôi tiếp tục theo dõi mẫu cấy trên môi trường có chứa PPT kết quả thu ñược như sau: Ở công thức ñối chứng toàn bộ mẫu ñều chết sau khi chọn lọc. Trong 3 dạng mẫu còn lại: chúng tôi nhận thấy khi sử
dụng tiền chối, tỷ lệ mẫu sống ñạt cao nhất 64,92 so với callus (53,03) và ñỉnh sinh trưởng (60,11). ðồng thời tổng số chồi khỏe sau chọn lọc thu ñược là 19 cao hơn nhiều so với hai dạng mẫu còn lại là callus và ñỉnh sinh trưởng. ðiều này có ñược cũng là nhờ tỷ lệ mẫu sống sau chọn lọc của tiền chồi cao ñạt 23,27% trong khi ñó callus chỉ ñạt 12% và ñỉnh sinh trưởng chỉñạt 14,31%, và tỷ lệ mẫu tái sinh sau chọn lọc cũng ñạt cao nhất 46,22% trong khi ñó ở
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp……… 43
Bảng 4.3. Ảnh hưởng của nguồn mẫu cấy ñến khả năng chuyển