3. Nội dung nguyên liệu và ph−ơng pháp nghiên cứu
3.3.1. Kiểm nghiệm vaccine
Vaccine đ−ợc kiểm nghiệm để đánh giá các chỉ tiêu thuần khiết, an toàn và hiệu lực tại Trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc Thú y Trung −ơng I [4], so sánh với hồ sơ kỹ thuật của các nhà sản xuất [25].
3.3.1.1. Chỉ tiêu thuần khiết
Vaccine cúm gia cầm của Trung Quốc và vaccine cúm gia cầm của Hà Lan đ−ợc kiểm tra trên các môi tr−ờng cơ bản: n−ớc thịt, n−ớc thịt gan yếm khí, thạch th−ờng và thạch nấm, mỗi loại 2 ống. Sau khi cấy, các môi tr−ờng đ−ợc bồi d−ỡng ở nhiệt độ 370C, riêng thạch nấm để ở nhiệt độ phòng (25- 300C). Môi tr−ờng đã cấy kiểm tra đ−ợc theo dõi trong 7 ngày, sau đó đọc kết quả.
3.3.1.2. Chỉ tiêu an toàn
tôi dùng 20 gà 4 tuần tuổi, giống ISA Brown nuôi chung với nhau và chia làm 2 nhóm:
*Nhóm gà kiểm tra an toàn: 10 gà đ−ợc tiêm vaccine vào bắp ức, mỗi gà 2 ml vaccine (4 liều/con).
*Nhóm gà đối chứng: 10 gà đối chứng không đ−ợc tiêm vaccine. Gà đ−ợc nuôi d−ỡng trong điều kiện thí nghiệm, đ−ợc theo dõi trong 28 ngày về diễn biến sức khoẻ, tình hình bệnh và các triệu chứng lâm sàng.
+ Vaccine cúm gia cầm Hà Lan: 20 gà 4 tuần tuổi, giống ISA Brown đ−ợc nuôi chung với nhau và chia làm 2 nhóm:
*Nhóm gà an toàn: 10 gà đ−ợc tiêm vaccine vào d−ới da cổ, mỗi gà 1,5 ml (3 liều/con).
* Nhóm gà đối chứng: 10 gà đối chứng không đ−ợc tiêm vaccine. Các nhóm gà đ−ợc nuôi d−ỡng trong điều kiện thí nghiệm, theo dõi trong thời gian 28 ngày về diễn biến sức khoẻ, tình hình bệnh và các triệu chứng lâm sàng.
3.3.1.3. Chỉ tiêu hiệu lực
* Thí nghiệm 1: Để kiểm nghiệm vaccine cúm gia cầm của Trung Quốc về chỉ tiêu hiệu lực, chúng tôi dùng 25 gà 4 tuần tuổi, giống ISA Brown. Gà thí nghiệm đ−ợc chia thành 2 lô:
+ Lô kiểm tra hiệu lực: 15 gà đ−ợc tiêm vaccine vào bắp ức, với liều 0,5 ml/gà.
+ Lô đối chứng: 10 gà không đ−ợc tiêm vaccine.
Lô kiểm tra hiệu lực và lô đối chứng đ−ợc nuôi tách biệt và đ−ợc sử dụng chung một qui trình nuôi d−ỡng. Gà thí nghiệm đ−ợc theo dõi trong 28 ngày về diễn biến sức khoẻ, tình hình bệnh và các triệu chứng lâm sàng.
Sau 3 tuần (21 ngày) theo dõi, gà thí nghiệm đ−ợc lấy máu, chắt huyết thanh và kiểm tra hàm l−ợng kháng thể kháng kháng nguyên cúm H5 bằng phản ứng HI.
* Thí nghiệm 2: Để kiểm nghiệm vaccine cúm gia cầm Hà Lan về chỉ tiêu hiệu lực, chúng tôi dùng 25 gà 4 tuần tuổi, giống ISA Brown. Gà thí nghiệm đ−ợc chia thành 2 lô:
+ Lô kiểm tra hiệu lực: 15 gà đ−ợc tiêm vaccine vào d−ới da cổ, với liều 0,5ml/con.
+ Lô đối chứng: 10 gà không đ−ợc tiêm vaccine.
Hai lô này đ−ợc nuôi riêng biệt nh−ng đ−ợc dùng chung một qui trình nuôi d−ỡng. Gà thí nghiệm đ−ợc theo dõi trong 28 ngày về diễn biến sức khoẻ, tình hình bệnh và các triệu chứng lâm sàng.
Sau 3 tuần (21 ngày) theo dõi, gà thí nghiệm đ−ợc lấy máu, chắt huyết thanh. Mẫu huyết thanh đ−ợc xét nghiệm kiểm tra kháng thể kháng kháng nguyên H5 bằng phản ứng HI.