Phân lập bằng phương pháp nuôi cấy trên môi trường thạch

Một phần của tài liệu phân lập và lưu giữ giống tảo lục chlorella sp (Trang 33 - 34)

- Chuẩn bị môi trường thạch : pha 15g agar với 1L nước biển 25‰ (đun sôi nước biển rồi thả agar vào, lắc cho agar tan đều rồi đưa đi hấp, sau đó để nguội agar

đến nhiệt độ khoảng 40-50ºC rồi cho môi trường dinh dưỡng vào theo tỉ lệ 1mL/1L. Lắc đều cho môi trường hòa tan vào agar rồi để khoảng 2-3 phút cho tan hết bọt rồi

đổ vào đĩa petri đã được khử trùng (10mL/đĩa).

- Khi thạch đông, nguội thì tiến hành cấy tảo. Cấy tảo theo 2 phương pháp là

ria hoặc trải.

- Băng kín đĩa petri bằng parafin rồi để trong tủ lạnh với nhiệt độ khoảng 22-23oC. - Sau 7-10 ngày thấy xuất hiện khuẩn lạc tảo màu xanh và nhiều khuẩn lạc khác trên bề mặt thạch. Dùng que cấy lấy các khuẩn lạc tảo màu xanh đem soi dưới kính hiển vi để xác định quần lạc tảo mình cần phân lập, dùng que cấy lấy các khuẩn lạc tảo đó ra rồi chuyển vào ống nghiệm đã có sẵn 9mL nước nuôi tảo.

- Lắc ống nghiệm ngày 2 lần, kiểm tra ống nghiệm hằng ngày. Khoảng 3-4 ngày, tảo trong ống nghiệm phát triển và có màu xanh, lấy mẫu tảo đem soi dưới kính hiển vi để xác định độ thuần chủng của tảo. Nếu tảo đạt độ thuần chủng từ 90- 95% thì tiến hành đưa tảo ra nhân sinh khối. Nếu độ thuần chủng thấp hơn thì tiến hành lặp lại thí nghiệm này.

- Xác định độ thuần chủng của tảo: đếm số tế bào tảo Chlorella sp trong tổng số các tế bào tảo có trong mẫu. Việc thu và đếm các tế bào tảo được tiến hành vào thời gian khoảng 5 ngày kể từ ngày lấy khuẩn lạc tảo trong đĩa petri đưa vào môi trường nuôi. - Thí nghiệm được lặp lại 3 lần. - Điều kiện thí nghiệm : + Độ mặn: 25‰ + Nhiệt độ: 25-27ºC + Cường độ ánh sáng: 3000-4000lux

+ Thời gian chiếu sáng: 18h/ngày

Một phần của tài liệu phân lập và lưu giữ giống tảo lục chlorella sp (Trang 33 - 34)