- Pseudomonas sp
1 Furazolidone SS S SS 2 Neomycine S S N S S
3 Gentamycine S S S S S 4 Penicilline R R R R R 5 Ampicilline R R R R R 6 Tetramycine R R S R R 7 Streptomycine R R S R R 8 Chloramphenicol R R S R R 9 Sulfamethoxazole N R S R N
* Ghi chú: R: khâng thuôc; S: nhây cạm ; N: ít nhây cạm
Phan Vản Ninh vă coơng sự (1993) đê nghieđn cứu tính nhây cạm thuôc cụa vi khuaơn Aeromonassp. phađn laơp từ câ he nuođi trong bỉ tâi An giang bị beơnh tuoơt vạy vă xuđt huyít. Kít quạ nghieđn cứu cho thđy vi khuaơn gađy beơnh nhây cạm với chloramphenicol, furazolidon; ít nhây cạm với streptomycine, chlotetracyline; đeă khâng ampicilline vă penicilline. Từ kít quạ nghieđn cứu năy, câc tâc giạ đeă xuđt vieơc sử dúng khâng sinh trong vieơc trị beơnh cho câ nuođi. Kít quạ nghieđn cứu năy cũng được người nuođi câ bỉ tâi An giang vaơn dúng phòng vă trị beơnh xuđt huyít cho câ basa, tuy nhieđn hieơu quạ chữa trị thđp. Kít quạ thử nghieơm tính nhây cạm thuôc cụa câc chụng vi khuaơn phađn laơp đê trình băy tređn đađy góp phaăn giại thích tính hieơu quạ thđp cụa cođng tâc chữa trị beơnh cho câ basa tâi An Giang trong những nảm gaăn đađy. Đeă tăi nghieđn cứu năy chưa tiín hănh so sânh câc chụng Aeromonas sp. đê phađn laơp được với câc chụng do Phan Vản Ninh vă coơng sự đê cođng bô do câc chụng vi khuaơn năy khođng được lưu giữ. Tuy nhieđn, có nhieău khạ nảng raỉng, do vieơc sử dúng phoơ biín câc lối thuôc khâng khuaơn trong ngheă nuođi câ, đê hình thănh nhieău chụng vi khuaơn khâng thuôc trong mođi trường nước tâi câc đieơm nuođi câ ở An Giang. Tình hình năy đòi hỏi caăn có câc nghieđn cứu sađu hơn veă khu heơ vi sinh vaơt nước tâi An Giang, vă nghieđn cứu câc bieơn phâp phòng trị beơnh hữu hieơu, hân chí vieơc sử dúng thuôc thiíu chĩn lĩc nhaỉm đạm bạo sự phât trieơn ngheă nuođi troăng thụy sạn beăn vững tâi địa phương.
III.4 Kít quạ thực nghieơm gađy nhieím trở lâi
III.4.1 Câc chụng vi khuaơn sử dúng cho thí nghieơm
Qua quâ trình phađn laơp, nuođi cđy, định danh vi khuaơn, đê lưu giông 5 lối vi khuaơn: Pseudomonas sp (chụng STB116971), A. caviae (SHB4108972), A. sobria
(STB511983), A. hydrophila (SHB681984), vă Aeromonas sp (SHB6111985). Từ kít quạ phađn laơp vi khuaơn định tính, đê chĩn hai chụng vi khuaơn A. hydrophila
SHB681984 vă A. sobria STB511983 gađy nhieím thực nghieơm cho câ ba sa đeơ xâc 58
định tính chđt gađy beơnh (pathogenicity) cụa câc lối vi khuaơn năy.
III.4.2 Tính chđt gađy beơnh cụa A. hydrophila SHB681984
+ Câ thí nghieơm: Câ thí nghieơm có chieău dăi trung bình 9,5cm ( 8,0-10,3 cm),
khôi lượng trung bình: 8,5 gr/con (5,3 -11,9 gr). Sau khi tieđm dung dịch muôi sinh lý (nhóm câ đôi chứng) hoaịc canh khuaơn, câ được nuođi trong beơ kính theo từng nhóm, moíi beơ 10 con. Nhieơt đođï khođng khí trung bình trong thời gian thí nghieơm 35 -37o C.
Hình 6. Beơ bô trí thí nghieơm gađy nhieím trở lâi tređn câ ba sa
Kít quạ theo dõi câ thí nghieơm: Thí nghieơm tiín hănh từ ngăy 8 thâng 5 nảm
1998. Sau khi tieđm xong, câ văn bơi loơi vă baĩt moăi bình thường. Sau 28 giờ, moơt sô câ có trieơu chứng khâc thường: trương búng, bơi loơi quay tròn khođng định hướng, moơt sô ngữa búng, hođ hđp mânh, treo mình thẳng đứng trong nước. Bieơu hieơn beđn ngòai: xuđt huyít vi búng, vi haơu mođn, vi đuođi, haơu mođn loăi đỏ. Khoạng 2 - 3 giờ
sau khi quan sât thđy câc bieơu hieơn tređn, moơt sô câ chít. Giại phaơu câc câ theơ năy đeơ quan sât noơi tâng, nhaơn thđy mâch mâu trương to, gan sưng vă có mău đen, maơt sưng, ruoơt trương phoăng chứa đaăy hơi, thănh búng xuđt huyít. Câ chít nhieău trong vòng 31 - 46 giờ sau khi tieđm canh khuaơn, sau đó chít rêi râc trong 7 ngăy đaău. Từ ngăy thứ 8 khođng thđy câ bị chít. Tỷ leơ sông cụa câc nhóm câ thí nghieơm được trình băy tâi bieơu đoă 5.
Bieơu đoă 5: Tỷ leơ sông cụa câc nhóm câ trong thí nghieơm gađy nhieím bởi vi khuaơn A. hydrophila SHB681984
0 20 40 60 80 100 0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240
Thời gian thí nghieơm (giờ)
Tỷ leơ sông (%) 10 cfu/ml 10 cfu/ml 10 cfu/ml Control
Sau 10 ngăy theo dõi, nhóm câ được tieđm 0,1 ml canh khuaơn chứa 107cfu/ml có tỷ leơ sông thđp nhđt (26,67%). Tỷ leơ sông tương ứng cụa câc nhóm câ được tieđm canh khuaơn 105, 103 laăn lượt lă 83,3%, vă 93,3%. Câ thuoơc nhóm đôi chứng khođng chít vă hoăn toăn khỏe mânh trong suôt quâ trình thí nghieơm.
+ Kít quạ phađn laơp vi khuaơn từ câ thí nghieơm: Ngay khi câ chít, đê tiín
hănh giại phaơu quan sât vă phađn laơp được A. hydrophila từ gan, thaơn vă lâch cụa câc câ theơ năy. Tređn mođi trường phađn laơp vi khuaơn chư thđy xuđt hieơn moơt dâng khuaơn lâc đaịc trưng duy nhđt.
Kít quạ thí nghieơm cho thđy, chụng A. hydrophila SHB681984 phađn laơp từ câ beơnh tâi An Giang có theơ gađy tỷ leơ tử vong cao cho câ thí nghieơm. Tỷ leơ sông cụa câc nhóm cẫ thí nghieơm có tương quan thuaơn với lượng vi khuaơn sử dúng. Câ thí nghieơm bị beơnh theơ hieơn dđu hieơu beơnh lý tương tự như trieơu chứng beơnh lý quan sât được tâi câc bỉ nuođi câ. Tỷ leơ sông 100% cụa nhóm câ đôi chứng cho thđy raỉng hieơn tượng câ chít trong câc lođ thí nghieơm khođng lieđn quan đín yíu tô chảm sóc quạn lý trong quâ trình thực hieơn. Đoăng thời, vieơc phađn laơp được duy nhđt A. hydrophila từ câ thí nghieơm bị beơnh cho thđy chụng A. hydrophila SHB681984 lă moơt tâc nhađn gađy beơnh xuđt huyít tređn vi vă xoang mieơng câ basa nuođi bỉ tâi An Giang. Maịt khâc, tỷ leơ tử vong thđp cụa câc nhóm câ tieđm với noăng đoơ vi khuaơn 103 vă 105 cho thđy A. hydrophila SHB681984 lă tâc nhađn gađy beơnh khođng baĩt buoơc (opportunistic pathogen) đôi với câ ba sa trong đieău kieơn tiín hănh thí nghieơm.
III.4.3 Tính chđt gađy beơnh cụa A. sobria STB511983
+ Câ thí nghieơm: Câ thí nghieơm có chieău dăi trung bình 10,9cm (10,0
-12,7cm), khôi lượng trung bình: 9,3 g (8 -11 g). Sau khi tieđm dung dịch muôi sinh lý (nhóm câ đôi chứng) hoaịc canh khuaơn, câ được nuođi trong beơ kính theo từng nhóm, moíi beơ 10 con tương tự như trình băy phaăn tređn. Nhieơt đođï khođng khí trung bình trong thời gian thí nghieơm 33 - 36o C.
+ Kít quạ theo dõi câ thí nghieơm: Thí nghieơm tiín hănh từ ngăy 23 thâng 7
nảm 1998. Sau khi tieđm xong, câ văn bơi loơi vă baĩt moăi bình thường. Trong suôt 15 ngăy sau khi gađy nhieím, khođng phât hieơn được dđu hieơu beơnh lý khâc lâ xạy ra. Tỷ leơ sông 15 ngăy cụa câc nhóm câ được gađy nhieím thực nghieơm với A. sobria
STB511983 lieău lượng 0,1 ml dung dịch chứa 107, 105 , 103 cfu/ml vă nhóm đôi chứng lă 100%.
+ Kít quạ phađn laơp vi khuaơn từ câ thí nghieơm:
Sau ngăy thứ 15, chĩn 3 con câ đê được gađy nhieím với noăng đoơ 107 cfu/ml, giại phaơu quan sât vă phađn laơp vi khuaơn từ gan, thaơn, lâch. Kít qụa quan sât noơt tâng khođng phât hieơn dđu hieơu beơnh lý cụa beơnh xuđt huyít tređn tđt cạ câc câ theơ nghieđn cứu. Đoăng thời, đê phađn laơp được A. sobria từ câc câ theơ năy.
Kít quạ gađy nhieím thực nghieơm cho thđy, A. sobria STB5118983 với lieău lượng đê sử dúng khođng gađy beơnh xuđt huyít cho câ basa trong câc đieău kieơn thí nghieơm. Sự xuđt hieơn cụa vi khuaơn năy trong câc mău câ beơnh thu được từ câc bỉ nuođi câ tâi An giang có theơ giại thích raỉng đađy lă tâc nhađn thứ cđp vă khođng đóng vai trò quan trĩng trong quâ trình phât sinh beơnh xuđt huyít cụa câ ba sa.
Do khođng có đụ sô lượng câ giông dùng cho thí nghieơm gađy nhieím trở lâi vă hân chí veă maịt thời gian, neđn tính chđt gađy beơnh cụa câc chụng Aeromonas sp., A. caviae, vă Pseudomonas sp phađn laơp từ câ beơnh chưa được nghieđn cứu. Tuy nhieđn, do câc chụng vi khuaơn A. caviae chư phađn laơp được từ câ beơnh trong mùa mưa (Bạng 24), vă Pseudomonas sp chư phađn laơp được từ câ beơnh thu tâi câc bỉ nuođi tređn sođng Tieăn (Bạng 25), có theơ nhaơn định raỉng câc lối vi khuaơn năy lă tâc nhađn gađy beơnh thứ cđp (secondary pathogens). Ngược lâi, câc chụng Aeromonas sp. được phađn laơp từ câ beơnh thu tređn sođng Tieăn vă sođng Haơu, cạ trong mùa mưa vă mùa khođ với taăn sô xuđt hieơn cao, vì vaơy, văn tiín hănh nghieđn cứu theđm veă vị trí phađn lối vă tính chđt gađy beơnh cụa câc chụng vi khuaơn năy.
CHƯƠNG II
VAƠT LIEƠU, PHƯƠNG PHÂP NGHIEĐN CỨU VĂ BÔ TRÍ THÍ NGHIEƠM TRÍ THÍ NGHIEƠM
II.1 Phương phâp thu thaơp sô lieơu
* Sô lieơu veă vị trí địa lý, kinh tí xê hoơi, tình hình sạn xuđt, phât trieơn nođng nghieơp vă Thụy sạn tưnh An giang, thu thaơp từ câc vản bạn bâo câo định kỳ, tăi lieơu lưu trữ cụa sở Nođng Nghieơp & Phât Trieơn Nođng Thođn, cúc Thông keđ, sở Khoa Hĩc Cođng Ngheơ & Mođi Trường, cođng ty Xuđt nhaơp khaơu Thụy sạn An giang (Agifishco).
* Phỏng vđn trực tiíp câc cân boơ kỹ thuaơt Thụy sạn vă cân boơ quạn lý tâi địa phương có nuođi câ ba sa veă tình hình nuođi câ bỉ vă hieơn tượng beơnh boơc phât.
* Phỏng vđn ngư dađn nuođi câ ba sa bỉ veă kỹ thuaơt nuođi câ, sự xuđt hieơn beơnh, trieơu chứng vă mùa vú.
* Câc sô lieơu thu thaơp từ kít quạ xử lý, phađn tích mău câ ba sa beơnh veă vi khuaơn hĩc, thực nghieơm cạm nhieím vi khuaơn trở lâi câ khỏe, thực hieơn tâi phòng thí nghieơm Sinh hĩc - Thực nghieơm vieơn Nghieđn cứu Nuođi troăng Thụy sạn II - Thănh phô Hoă Chí Minh.
II.2 Địa đieơm vă thời vú thu mău
+ Địa đieơm thu mău
Sođng Tieăn: Mău câ ba sa beơnh, thu tâi câc bỉ nuođi câ đp Long chađu, xê Long an, huyeơn Tađn chađu, đp Long thânh, Long hòa, xê Long sơn, huyeơn Phú tađn, xí nghieơp Đođng lânh Thụy sạn sô 7 thuoơc Agifish.
Sođng Haơu: Mău câ beơnh thu tâi xí nghieơp Đođng lânh Thụy sạn sô 7 thuoơc
Agifish, nguoăn câ từ câ bỉ nuođi tâi Chađu đôc.
+ Thời vú thu mău
Toơng sô lượng mău thu: 80 mău.
Mùa mưa: thu mău văo câc thâng 6, 7 nảm 1997, toơng sô mău thu 53 mău (sođng Tieăn 32 mău, sođng Haơu 21 mău).
Mùa khođ: thu mău văo thâng gieđng nảm 1998, toơng sô mău thu 27 mău (sođng Tieăn 10 mău, sođng Haơu 17 mău), trong đo ù có 5 mău đôi chứng ( câ khođng thđy bieơu hieơn beơnh lý beđn ngòai) có nguoăn gôc bỉ nuođi tâi sođng Haơu.
II.3 Phương phâp kieơm tra toơng theơ mău caù
Mău vaơt còn tươi sông - câ vừa mới chít - được đo chieău dăi, cađn trĩng lượng, quan sât baỉng maĩt thường dđu hieơu beơnh lý bieơu hieơn beđn ngòai veă hình dâng, trâng thâi, mùi, mău saĩc câ, câc boơ phaơn như maĩt, xoang mieơng, mang, câc vi vă haơu mođn.
Giại phaơu quan sât bieơu hieơn beơnh lý noơi quan ở gan, lâch, thaơn, dâ dăy, ruoơt, bóng hơi, mođ mở, xoang búng.
II.4 Phương phâp thu, bạo quạn, vaơn chuyeơn vă xử lý sơ boơ mău câ + Phương phâp thu mău
- Thu mău câ beơnh ở beø
Câ ba sa có bieơu hieơn bđt thường như bỏ ản, bơi lờ đờ tređn maịt nước, hoaịc trođi ngữa búng, tđp văo maịt khâi bỉ dưới dòng nước chạy, câ còn thở thoi thóp, được vớt leđn khỏi nước baỉng vợt lưới.
- Thu mău câ ba sa beơnh tâi xí nghieơp Đođng lânh sô 7
Câ ba sa nguyeđn lieơu, được vaơn chuyeơn baỉng ghe đút từ bỉ nuođi đín xí nghieơp Đođng lânh. Tđt cạ câ haău hít đeău còn sông, câ khỏe mânh bơi loơi bình thường, câ
có bieơu hieơn câc dđu hieơu beơnh lý khi quan sât beđn ngoăi khođng sử dúng đeơ chí biín. Câ naăy được thu lăm mău nghieđn cứu.
+ Vaơn chuyeơn, xử lý sơ boơ mău câ vă bạo quạn mău vaơt
Câ ba sa beơnh thu mău tâi bỉ hay tâi xí nghieơp Đođng lânh sô 7 , trước tieđn mău vaơt được đânh sô, ghi teđn lòai câ beơnh, thời gian, địa đieơm thu mău, teđn người thu mău.
Mău vaơt thu, nghieđn cứu veă vi khuaơn định tính: được cđy trong mođi trường BHI chứa trong ông nghieơm 5ml. Câc ông nghieơm được coơt bó chaịt, gói giđy kín
đựng trong hoơp nhựa, đeơ trânh nghieđng đoơ.
Mău vaơt nghieđn cứu veă vi khuaơn định lượng: đựng gan câ trong túi PE, dân
kín, giữ lânh trong thùng xôp.
Sau khi xử lý sơ boơ, mău vaơt được vaơn chuyeơn baỉng xe bus tôc hănh, từ nơi thu mău đín phòng thí nghieơm cụa vieơn Nghieđn Cứu Nuođi Troăng Thụy Sạn II. Thời gian từ lúc thu mău đín khi xử lý mău tâi phòng thí nghieơm khođng quâ 24 giờ.
II.5 Phương phâp phađn laơp, nuođi cđy vă định danh vi khuaơn - Xử lý mău phađn laơp định tính
Vi khuaơn phađn laơp từ câc cơ quan gan, thaơn, lâch cụa câ, cđy trực tiíp văo mođi trường BHI (Brain Heart Infusion Broth), chứa trong ông nghieơm 5 ml đê được thanh trùng baỉng Autoclave, đeơ văo tụ đm, nhieơt đoơ 30oC, trong 24 giờ.
Khi vi khuaơn đê tảng sinh khôi, được cđy chuyeăn sang mođi trường khođng chĩn lĩc (nonselective media) TSA (Tryptone Soya Agar) vă mođi trường chĩn lĩc (selective media) Aeromonas Isolation Medium Base. Tđt cạ đeơ trong tụ đm, nhieơt đoơ 30oC. Khi khuaơn lâc mĩc đaăy đụ, chĩn những khuaơn lâc rời, chiím ưu
thí, tiíp túc cđy lâi tređn mođi trường TSA, chĩn giông thuaăn, roăi cđy chuyeăn sang mođi trường BHIA (Brain Heart Infusion Agar) đeơ lưu giông.
+ Nhuoơm Gram đeơ quan sât hình thâi vi khuaơn theo phương phâp Hucker’s
Modification.
+ Thực hieơn câc phạn ứng sinh hóa, định danh vi khuaơn theo heơ thông
phađn lĩai vi khuaơn cụa Bergey (1981).
Sử dúng câc phạn ứng sinh hóa thực hieơn định danh vi khuaơn.
1. Oxydase 2. Catalase 3. OF/O ; OF/ F 4. KIA 5. MR - VP 6. Simons citrate
7. Phenylalanine (agar) 8. Urea 9. Indol 10. Nitrat 11. Arginine 12. Ornithine 13. Lysine 14. H2S Production 15.Motility 16. KCN 17.ONPG 18. Gelatine 19. Glucose (gas) 20. Latose 21. Arabinose 22. Maltose 23. Sucrose (Saccarose) 24. Rhaminose 25. Malnitole 26. Sorbitole 27. Galactose
28. Inositole
+ Sử dúng API kit (Analytical Profile Index) định danh vi khuaơn phađn
laơp laăn hai.