- Thermonuclease cụa S aureus: cũng như tât cạ các vi sinh vaơt khác S aureus đeău có theơ toơng hợp DNAse ngối bào, như có đieơm khác bieơt so với tât cạ các loài vi sinh vaơt khác,
17. Thử nghieơm Voges – Proskauer (VP)
Nguyeđn taĩc: Phát hieơn khạ naíng vi sinh vaơt táo thành moơt sô sạn phaơm trung tính acetylmethylcarbimol (acetoin) trong quá trình leđn men glucose.
Cơ sở sinh hoá: Thử nghieơm VP nhaỉm múc đích phát hieơn acetoin, moơt sạn phaơm trung tính trong quá trình trao đoơi glucose trong tê bào vi sinh vaơt. Quá trình phađn huỷ glucose trong tê bào vi sinh vaơt táo ra sạn phaơm trung gian là acid pyruvic, từ đađy có theơ chia vi sinh vaơt thành hai nhóm theo hai cong đường chuyeơn hoá pyruvic khác nhau như sau: Nhóm trao đoơi khođng táo thành 2,3-butanediol, ví dú như E.coli được gĩi là nhóm VP ađm tính (VP-); nhóm thứ hai quá trình trao đoơi này táo thành sạn phaơm trung gian là 2,3-butanediol, ví dú như Klebsiella, được gĩi là nhóm VP dương (VP+). Tuy nhieđn thử nghieơm VP nhaỉm múc đích phát hieơn acetoin (acetylmethylcarbimol, AMC) moơt tieăn chât cụa 2,3-butanediol.
Phađn tử acetoin được táo thành do quá trình khử nhóm carboxyl cụa acid pyruvic, phạn ứng như sau:
2 Pyruvate acetoin + 2CO2
Vì acetoin là moơt sạn phaơm trung gian trong bước táo thành 2,3-butanediol neđn trong mođi trường nuođi cây tích lũy moơt lượng rât ít tieăn chât này. Đeơ acetoin tích lũy nhieău, deê dàng cho vieơc phát hieơn, vi sinh vaơt phại nuođi trong đieău kieơn hiêu khí. Quá trình chuyeơn hoá giữa acetoin và 2,3-butanediol là moơt quá trình thuaơn nghịch, có theơ bieơu dieơn quá trình này như sau:
Oxyhoá
2,3-butanediol acetoin
2,3-butanediol dehydrogenase Khử
Acetoin 2,3-butanediol
diacetyl (acetoin) reductase
Urea Amonia
Amonia carbonat
37 Đeơ phát hieơn acetion trong mođi trường nuođi cây 1-napthol được sữ dúng như moơt thuôc thử phát hieơn trong mođi trường kieăm mánh được táo ra do KOH 40% hay NaOH 40% được cho vào mođi trường thử nghieơm.
Cơ chê phạn ứng nhaơn biêt acetoin được bieơu dieên như sau:
CH3 C = O C6H12O6 CHOH CH3 OH CH3 CH3 + C = O C = O + H2O CHOH C = O CH3 CH3 CH3 C = O Glucose Acetoin Acethylmethylcarbinol, AMC KOH 40% O2
α - Napthol Acetoin Diacetyl
NH2
C = NH NH - R +
38 C = O
CH3
Trong các thành phaăn tham gia phạn ứng đeơ táo phức chât có màu đỏ hoăng có hợp chât guanidine, ví dú arginine NH:C(NH2)-NH-(CH2)3-CH(NH2)-COOH, chât này hieơn dieơn trong pepton được sử dúng trong mođi trường nuođi cây.
Phương pháp tiên hành: Cây vi sinh vaơt vào trong mođi trường canh glucose phosphate (MR-VP broth), ụ ở nhieơt đoơ 37oC trong khoạng 2-5 ngày. Theđm vào canh khuaơn sau nuođi cây 3ml dung dịch 1-napthol 5% trong coăn, boơ sung theđm 3ml dung dịch KOH hay NaOH 40%, laĩc mánh. Quan sát phạn ứng trong khoạng 5 phút. Phạn ứng VP dương tính khi mođi trường chuyeơn sang màu đỏ hay hoăng sáng, phạn ứng VP ađm tính khi khođng có sự chuyeơn màu này.