Nguyeđn taĩc
- thử nghieơm DNAse nhaỉm phát hieơn khạ naíng toơng hợp enzym deoxyribonuclease (Dnase) đeơ phađn huỷ DNA.
- Thử nghieơm thermonuclease nhaím thử nghieơm tính beăn nhieơt cụa Dnase từ
Staphylococcus aureus khi vi sinh vaơt được đun nóng.
Cơ sở sinh hoá
Thử nghieơm DNAse: Enzym nuclease là enzym phađn huỷ acid nucleic được chia thành hai nhóm như sau: Nhóm 1. Endonuclease là những enzym phađn huỷ các nôi phosphodiester ở beđn trong mách DNA đeơ táo ra các đaău 3’-hydroxyl và 5’-phosphoryl hay 5’-hydroxyl và 3’- phosphoprryl. Nhóm 2. Exonuclease chư phađn huỷ các nucleotide ở các đaău taơn cùng cụa chuoêi DNA . Moơt sô nuclease có theơ phađn huỷ cạ hai mách tređn sợi DNA, moơt sô khác chư có theơ phađn huỷ moơt mách đơn. DNA có các đaịc tính vaơt lý và hoá hĩc khác với nucleotide và oligonucleotide. Sự khác bieơt này được dùng đeơ phát hieơn sự ly giại DNA bởi các enzym Dnase.
Dnase là moơt enzym ngối bào, chúng chư phađn huỷ các acid nucleic. Haău hêt tât cạ các Dnase vi khuaơn đeău caăn moơt cation hóa trị hai đeơ cho enzym này hốt đoơng. Cation thođng thường hieơn dieơn trong các pepton được sử dúng trong mođi trường nuođi cây thử nghieơm. Hốt đoơng cụa enzym xạy ra trong khoạng pH 5,5-8,5 nhưng thích hợp nhât tái pH 7,2. Có theơ phađn bieơt nhieău lối DNAse baỉng các kháng theơ hay baỉng các tác nhađn ức chê.
Khi phađn giại, khoạn ¼ sô nôi phosphodiester hay nôi hydrogen bị phađn huỷ và thu được moơt hoên hợp các oligonucleotide trong mođi trường nuođi cây. Trong hoên hợp này goăm có các đốn DNA có taơn cùng là 3’-hydroxyl và 3’-phosphoryl; 5’hydroxyl và 5’-phosphoryl. Khi DNA còn lái các mách ngaĩn, nađng nhieơt đoơ hay pH cao quá bính thườmg sẽ làm biên tính các đốn này. Khi có hieơn tượng biên tính, hoên hợp DNA sẽ giạm đoơ nhớt và gia taíng mức đoơ hâp thu UV ớ bước sóng 260nm. Hieơu ứng thay đoơi này là do có noăng đoơ deoxyribonucleotide gia taíng trong dung dịch so với cơ chât DNA ban đaău.
DNA hieơn dieơn trong các dịch chiêt vi sinh vaơt. Nhưng DNAse ngối bào chư hieơn dieơn ở moơt sô loài như S. aureus hay Streptococcus nhóm A…