- Pipet, pipetman
a.Pha loãng mẫu
- Hút 1 ml n−ớc thải vμo ống nghiệm thứ nhất có chứa 9 ml n−ớc cất vô khuẩn.
- Trộn đều dung dịch bằng cách hút lên rồi thổi xuống 3 - 5 lần. Độ pha loãng mẫu lúc nμy lμ 10- 1.
- Tiếp tục hút 1 ml ở ống nghiệm thứ nhất cho vμo ống nghiệm thứ hai chứa 9 ml n−ớc cất vô khuẩn.
- Cứ tiếp tục nh− vậy để có mẫu ở các độ pha loãng 10-3, 10-4, 10-5, 10-6,…
Tùy theo nồng độ vi sinh vật −ớc đoán trong mẫu mμ tiến hμnh pha loãng mẫu với các tỉ lệ khác nhau.
b. Cách tiến hμnh
- Chuẩn bị môi tr−ờng thạch đĩa: môi tr−ờng MPA, Czapek, Hansen đ−ợc khử trùng ở 1 atm trong 30 phút, đổ vμo các đĩa petri vô trùng, chờ thạch đông vμ khô mặt thạch.
- Ghi vμo đáy đĩa petri có môi tr−ờng thạch thích hợp với từng loại vi sinh vật các thông tin: + Nồng độ pha loãng
+ Ngμy cấy
- Dùng pipetman gắn đầu côn vô trùng lấy từ các độ pha loãng thích hợp nhỏ vμo mỗi đĩa petri 0,1 ml (t−ơng đ−ơng với 2 giọt dịch ), mỗi độ pha loãng đ−ợc lặp lại 3 lần. Dùng que gạt vô trùng dμn đều dịch tế bμo lên khắp bề mặt thạch. Số tế bμo cấy trên bề mặt thạch phải đ−ợc dμn đều vμ không nên v−ợt quá vμi trăm.
- Các đĩa petri đã đ−ợc cấy dịch tế bμo, gói kín vμ đặt úp ng−ợc đĩa trong tủ ấm 370C. Sau 24 giờ đếm số khuẩn lạc trong mỗi đĩa.
c. Cách đếm
- Lấy bút chì kẻ hai đ−ờng vuông góc d−ới đáy đĩa Petri vμ đánh dấu thứ tự từng vùng I, II, III, IV.
- Đếm số khuẩn lạc trong từng vùng, nhớ đánh dấu các khuẩn lạc đã đếm. - Số l−ợng tế bμo vi sinh vật trong 1 ml mẫu đ−ợc tính theo công thức sau đây:
Số tế bμo n
ml mẫu = v . D
Trong đó:
n: số khuẩn lạc trung bình trong một đĩa petri ở một độ pha loãng nhất định. v: thể tích dịch mẫu đem cấy.
D: hệ số pha loãng
2.4.3.2 Ph−ơng pháp phân lập vi khuẩn từ bùn hoạt tính và màng sinh học [2, 30, 38] a. Pha loãng mẫu ( tiến hμnh t−ơng tự nh− trên) a. Pha loãng mẫu ( tiến hμnh t−ơng tự nh− trên)
b. Cấy mẫu
- Thể tích các mẫu đ−ợc cấy lên thạch đĩa th−ờng lμ 0,1 ml.
- Lấy que gạt vô khuẩn phân bố đều mẫu trên bề mặt thạch. Đậy nắp đĩa lại để thấm hút hết mẫu trong vμi phút.