- Si O Si + (C H) SiNHSi(CH ) Si O Si + NH OH OH ( CH ) SiO OSi(CH )
3.3.1.Sắc kí phân bố hiệu năng cao
Chương 3: SẮC KÍ LỎNG (LIQUID CHROMATOGRAPHY)
3.3.1.Sắc kí phân bố hiệu năng cao
Gồm hai loại phương pháp sắc kí lỏng-lỏng và sắc kí pha liên kết
Sắc kí lỏng lỏng (LLC) :
Pha tĩnh là chất lỏng được phủ trên bề mặt của các hạt chất mang (support).
Pha tĩnh thường bị dung môi hòa tan và mất dần làm cột dần mất hiệu lực nên phương pháp này ngày càng ít được sử dụng.
Sắc kí pha liên kết (bonded phase chromatography)
Pha tĩnh được gắn hóa học (liên kết) với chất mang (hạt silicagen) tạo nên hợp chất cơ- siloxan (hình 3.2).
Nếu R là một nhóm ít phân cực như octyl (C8), octadecyl (C18) hay phenyl và pha động là dung môi phân cực như H2O, methanol, acetonitril thì có sắc kí pha đảo (hay sắc kí pha ngược). Ở đây pha tĩnh ít phân cực hơn pha động, trái với truyền thống của sắc kí trước đây là pha tĩnh phân cực hơn pha động.
Nếu R là nhóm khá phân cực như alkylamin –(CH2)nNH2 hay alkylnitril –(CH2)n-CN và pha động là dung môi ít phân cực như hexan thì ta có sắc kí pha thuận.
Hiện nay sắc kí pha đảo được dùng rộng rãi vì những lí do sau:
o Các phân tử không phân cực, ít phân cực, ion, hoặc có thể ion hóa có thể được tách một cách hiệu quả.
o Pha tĩnh có một khoảng phân cực rất rộng để có thể chọn lựa. o Nó cho phép chọn một khoảng rộng chất rửa giải.
o Các chất dung môi rửa giải rất thông dụng và không đắt (nước, methanol và acetonitril).
o Không có hạn chế về áp suất pha động đi vào cột. o Nó cho kết quả tách tốt với rất nhiều đối tượng tách.
Hình 3.2: Sơ đồ tổng hợp các pha tĩnh pha liên kết hóa học
Chọn các pha: thường chọn pha tĩnh có tính phân cực giống với các chất cần tách và khác với pha động. Các chất hữu cơ có độ phân cực tăng theo thứ tự sau:
Hydrocacbon no, ôlefin, hydrocacbon thơm, halogenua, sunfua, ête, dẫn xuất nitro, este = andehit = xeton, ancol =amin, sunfon, sunfoxit, amit, axit cacboxilic, nước.
Thứ tự rửa giải trong sắc kí pha thuận là các chất không phân cực ra trước rồi đến các chất phân cực mạnh hơn.
Trong sắc kí pha đảo các chất phân cực ra trước rồi đến các chất ít và không phân cực lần lượt ra sau.
Ứng dụng: sắc kí lỏng phân bố hiệu năng cao được dùng trong việc tách các chất thuộc nhiều lĩnh vực như:
Axit amin, protein, hydrat cacbon, lipid…
Đường nhân tạo, chất chống oxi hóa, chất phụ gia, aflatoxin…
Chất thơm, chất điện hoạt, chất màu, hóa chất công nghiệp…
Thuốc trừ sâu, diệt cỏ, phenol và các dẫn xuất phenol…
Thuốc, chất độc, cồn trong máu…