- Nuôi cấy vi khuẩn ở 370C, 24 giờ.
3.2.2.3.9 Thử nghiệm khả năng kháng vi sinh vật bằng phƣơng pháp đo độ đục
[4].
Mục đích: Những vi sinh vật mang đặc tính probiotic phải là những sinh vật có khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn gây bệnh nên trong thí nghiệm này, chúng tôi kiểm tra khả năng ức chế sự phát triển vi khuẩn gây bệnh của những chủng vi khuẩn LAB phân lập được nhằm tuyển chọn những chủng mang đặc tính probiotic. Trong thí nghiệm này chúng tôi chọn vi khuẩn E. coli là vi sinh vật chỉ thị.
Nguyên tắc: khi một pha lỏng có chứa nhiều phân tử không tan sẽ tạo thành một hệ huyền phù và có độ đục bởi các phân tử hiện diện trong môi trưởng lỏng cản ánh sáng, làm phân tán chùm ánh sáng tới. Tế bào vi sinh vật là một thực thể nên khi hiện diện trong môi trường cũng làm cho môi trường trở nên đục. Độ đục của huyền phù tỉ lệ thuận với mật độ tế bào. Do đó, thông qua việc đo độ đục bằng máy quang phổ kể ở bước sóng 600nm của dịch huyền phù tế bào ta có thể định tính được mật độ vi sinh vật ở điều kiện cần khảo sát
Ống đối chứng là sự phát triển bình thường của VK chỉ chị E. coli. Ống kiểm tra là dịch nuôi cấy vi khuẩn đã ly tâm, nếu vi khuẩn LAB có tính kháng khuẩn thì ống kiểm tra sẽ có mật độ tế bào thấp hơn ống đối chứng.
* Tiến hành:
Sơ đồ 3.2: Sơ đồ tiến hành thử nghiệm khả năng kháng vi sinh vật bằng phƣơng pháp đo độ đục
% OD = OD đối chứng * 100%)/ OD kiểm tra
Như vậy với %OD càng nhỏ thì khả năng kháng vi sinh vật của chủng đó càng cao.
D = 100% - %OD thể hiện khả năng kháng vi sinh vật của chủng đó, D càng lớn, khả năng kháng vi sinh vật càng cao.
Chú ý: kết quảthu được là số liệu trung bình của 3 lần lặp lại với mức ý nghĩa thống
Ống đối chứng Ống kiểm tra
Ly tâm dịch LAB (nuôi cấy kỵ khí 24h, 370
C) Lấy 30 µl Dịch nuôi cấy VK chỉ thị nuôi
cấy tăng sinh qua 24h Lấy 30 µl Cho vào 240 µl MT BHI Ủ hiếu khí 24h, 370C Ủ hiếu khí 24h, 370C Đo độ đục Đo độ đục So sánh độ đục, kết luận Cho vào 240 µl MT BHI+30 µl MRS Broth