- Nhuộm vỏ nhầy (Capsule): Phương pháp nhuộm âm bản, phương pháp Đỏ Congo, Phương pháp dùng Tím kết tinh (Crystal violet)
Chƣơng 3: VẬT LIỆU & PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.2.2 Phƣơng pháp phân lập vi khuẩn lactic 1 Tăng sinh
3.2.2.2.1. Tăng sinh
- Mục đích: kích hoạt các vi khuẩn lactic có trong chế phẩm. - Tiến hành:
Môi trường dùng để tăng sinh là môi trường MRS broth, hút 10ml cho vào mỗi ống nghiệm đem hấp khử trùng ở 1210C, trong 15 phút.
Với các mẫu là dạng dịch như: sữa chua, nức dưa muối, nước cà muối, hút 1ml cho vào ống nghiệm chứa 10ml MRS broth, với các mẫu là dạng rắn như nem láy khoảng 2g, đánh tơi cho vào ống nghiệm chứa MRS broth, với các mầu thuốc, cho trực tiếp khoảng 0.2g chế phẩm vào MRS broth.
Quấn parafin quanh nấp ống nghiệm cho kín đem ủ ở 370C, 24 giờ.
3.2.2.2.2. Phân lập
- Mục đích: tách các khuẩn lạc riêng lẻ tạo ra các chủng vi khuẩn lactic thuần nhất. - Tiến hành:
* Pha loãng mẫu
Môi trường phân lập là môi trường MRS bổ sung 20% agar
Các mẫu sau khi tăng sinh sẽ được đem pha loãng bằng nước muối vô trùng, mỗi ống chứa 9ml.
+ Hút 1 ml mẫu vào ống nước cất vô trùng thứ nhất có độ pha loãng 10-1.
+ Hút 1 ml hỗn hợp nước cất và mẫu ở ống thứ nhất cho vào ống thứ hai có độ pha loãng 10-2.
+ Hút 1ml hỗn hợp ở ống thứ hai vào ống thứ ba có độ pha loãng10-3
- Tiếp tục thao tác tương tự để có độ pha loãng là 10-9
* Cách gieo cấy mẫu để tách khuẩn lạc vi khuẩn:
Lấy các ống nghiệm có độ pha loãng từ 10-5 ÷ 10-9, mỗi ống lấy 1,0ml cho lên bề mặt thạch chứa trong hộp petri. Tương ứng với mỗi độ pha loãng sẽ thực hiện trên hai hộp petri. Dùng que trang, trang điều canh trường với điều kiện không làm rách
370C,sau 24 giờ, các khuẩn lạc riêng lẻ vào các ống thạch nghiêng đã được chuẩn bị sẵn. Nuôi vi khuẩn đã được cấy chuyền sang ống thạch nghiêng trong tủ ấm ở nhiệt độ 35 - 370C, thời gian từ 24 giờ, bảo quản ống giống ở nhiệt độ 40
C.