Khử trùng mẫu nuôi cấy

Một phần của tài liệu nghiên cứu bổ sung chitosan oligomer trong nuôi cấy mô khoai lang cao sản nhật bản (Trang 26 - 28)

Một trong những bước quan trọng ñầu tiên quyết ñịnh ñến sự thành

công hay thất bại trong nhân giống in vitro cây ñầu dòng nói chung và cây khoai lang nói riêng là việc khử trùng mẫu cấy ñể ñưa chúng vào nuôi cấy trong ñiều kiện vô trùng. Phương pháp phổ biến trong vô trùng mẫu cấy hiện nay là sử dụng các hóa chất có khả năng tiêu diệt vi sinh vật. Hiệu quả diệt nấm, khuẩn của các chất này phụ thuộc vào thời gian, nồng ñộ xử lý và khả năng xâm nhập của chúng vào các ngõ ngách trên bề mặt mẫu cấy. Để tăng tính linh ñộng của hóa chất diệt khuẩn, người ta thường sử dụng thêm các chất làm giảm sức căng bề mặt như: Tween 20, Tween 80, Fotoflo, Teepol hoặc có thể xử lý phối hợp với cồn 70%. Một hóa chất ñược lựa chọn cho quá trình vô trùng mẫu cấy phải bảo ñảm hai thuộc tính: có khả năng diệt vi sinh

vật tốt và không hoặc có mức ñộ ñộc thấp ñối với mẫu thực vật. Trong các loại hóa chất trên, NaOCl, H2O2 và Ca(OCl)2 hay ñược dùng hơn vì chúng có mức ñộ ñộc tính thấp ñối với mẫu và không có biểu hiện ức chế sinh trưởng[19].

Theo Lê Thị Thu Về và cộng sự (1999), khi xử lý các củ hoa loa kèn bằng HgCl2 ở nồng ñộ 0,1% cho thấy ở thời gian xử lý 10 phút, số mẫu ñưa vào ñạt 100%[16].

Nguyễn Thế Anh, Trần Văn Minh (2007), khi nhân giống cây Pơmu nhận thấy khi khử trùng mẫu chồi ñỉnh và chồi bên bằng Natri hypochloride

10% trong 12 phút thu ñược tỷ lệ mẫu sống cao nhất (50,63%) [1]. Tuy nhiên, ñối với một số loại cây cần phải xử lý kết hợp hai loại chất

khử trùng thì mới ñem lại hiệu quả khử trùng cao. Huỳnh Thị Huế Trang và cộng sự (2007), nuôi cấy phân sinh mô chồi hoa huệ trắng ñã khử trùng bằng dung dịch sodium hypochloride (dưới dạng thương phẩm là Clorox) với tỷ lệ 1:1 trong 30 phút sau ñó rửa lại 3 lần bằng nước cất khử trùng và khử trùng

lại bằng dung dịch thuỷ ngân clorua 0,1% trong 10 phút [15] Dương Lan Oanh và cộng sự (2007), nghiên cứu về sự nhân chồi

và phát triển rễ của cây dứa cảnh ñã xử lý, mẫu bằng Clorox 10% trong 10 phút sau ñó rửa lại bằng nước cất vô trùng và khử trùng mẫu lại bằng thuỷ ngân clorua 0,2% cho thấy ở thời gian xử lý 8 phút số mẫu sống ñạt tỷ lệ cao nhất (85%)[12].

Khưu Hoàng Minh và cộng sự (2007), nghiên cứu vi nhân giống cây Trai Nam bộ cho thấy khi sử dụng riêng rẽ canxi hypochloride ñể vô trùng mẫu Trai thực sinh thì ở nồng ñộ 25% trong 30 phút cho tỷ lệ mẫu sống cao nhất là 4,4%. Nhưng khi sử dụng nồng canxi hypochloride 25% trong 30 phút kết hợp với HgCl2 0,05% trong 15 phút thì tỷ lệ mẫu sống vô trùng tăng lên 6,2%[11].

Khoai lang là cây thân thảo dạng dây leo hoặc bò trên mặt ñất, củ nằm trong ñất và ñược trồng trong vùng sinh thái rộng lớn, do ñó sự lựa chọn mẫu ñể kiểm soát và xử lý mầm bệnh là hết sức khó khăn. Hwang, Robert (1983) ñã tiến hành khử trùng bằng Clorox 10% (0,52% NaOCl) với mẫu là chóp

ngọn, chồi nách, mẫu lá hoặc mẫu cuống lá non[49].

Một phần của tài liệu nghiên cứu bổ sung chitosan oligomer trong nuôi cấy mô khoai lang cao sản nhật bản (Trang 26 - 28)