3. Ý nghĩa của ñề tài
2.3.5 Phương pháp tuyển chọn các chủng Azospirillum có khả năng cố ñịnh ñạm
ñạm bằng nghiên cứu thử nghiệm trên cây ngô
Đánh giá hoạt tính cố ñịnh ñạm của các chủng Azospirillum dựa trên N tổng số có trong lá và các chỉ tiêu sinh trưởng của cây ngô. N tổng số có trong lá
và các chỉ tiêu sinh trưởng của cây ngô của các lô thực nghiệm càng cao hơn so với lô ñối chứng, chứng tỏ hoạt tính cố ñịnh ñạm của chủng vi khuẩn càng mạnh.
* Phương pháp thí nghiệm: Hạt ngô lai C919 ñược khử trùng bằng H2O2 3% trong 3 phút, rửa lại 4 lần với nước cất. Sau ñó, cho hạt vào ñĩa petri có bông ñã ñược khử trùng, với một ít nước và ủ cho tới khi hạt nứt mộng chuẩn bị nảy mầm. Rửa sạch hạt bằng nước cất. Vi khuẩn Azospirillum ñược nuôi trong ống nghiệm sau 72h lấy dịch sinh khối tế bào cho hạt ngô vào và ngâm 15 phút. Sau ñó ñem gieo 1 hạt/bầu ñất. Loại ñất ñóng bầu là ñất ñỏ Bazan chỉ lấy lớp ñất mặt, mỗi bầu ñóng khoảng 5 kg ñất. Mỗi chủng Azospirillum có 1 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức có 15 bầu ñất, thí nghiệm ñược lặp lại 3 lần.
Nghiệm thức 1: Đối chứng không bón phân, không nhiễm vi khuẩn
Azospirillum
Nghiệm thức 2: Không bón phân, nhiễm vi khuẩn Azospirillum.
Các chỉ tiêu theo dõi cây ngô sau khi gieo 45 ngày: Chiều cao cây, số lá trên cây, chiều dài lá, ñường kính gốc, chiều dài rễ, khối lượng tươi, khô.
Các chỉ tiêu phân tích: Hàm lượng ñạm tổng số, hàm lượng diệp lục trong lá.
* Phương pháp xác ñịnh hàm lượng ñạm tổng số: Theo phương pháp Kjeldanl [2],[14].
* Phương pháp xác ñịnh hàm lượng diệp lục: Hàm lượng diệp lục (chlorophyll) và carotenoid ñược xác ñịnh bằng phương pháp so màu [36].
- Lấy 500mg lá, cắt nhỏ, ngâm trong 50ml aceton 80%, ñể trong tốị - Sau 3 ngày lấy toàn bộ dịch chiết ñịnh mức ñến 100ml. Sau ñó lấy dịch chiết ño ở các bước sóng 663nm, 645nm và 440,5nm.
Hàm lượng chlorophyll a (Ca), chlorophyll b (Cb) và carotenoid (Ccar) ñược tính theo công thức:
Ca = 0,0127 x OD663 - 0,00269 x OD645
Cb (mg x g-1) = 0,0299 x OD645 - 0,00468 x OD663