Kết quả và thảo luận
3.8Biểu hiện gen PRSVN
Gen PRSVN đã đợc đa vào vector pRSETA và đợc biến nạp vào chủng E.coli kết quả đợc kiểm tra băng cắt với enzim giới hạn (ảnh 8)
ảnh 8: kết quả cắt với enzime giới hạn để kiểm tra cấu trúc vector pRSETA có chứa gen PRSVN
DòngM: Marker 1Kb
Dòng 1: pRSETA-PRSVN đợc cắt với Xho I & Nco I Dòng 2: pRSETA-PRSVN đợc cắt với Nde I
Dòng 3: pRSETA-PRSVN đợc cắt với Hind III & Dra I Dòng 4: pRSETA-PRSVN không cắt
A: Clone 1 B: Clone 6
Dòng 1, chúng tôi nhận đợc băng ADN ~1,1 Kb, ~2,9 Kb. Băng 1,1Kb là gen PRSVN có kèm với Nos ter, còn băng 2,9Kb là phần của vector pRSETA. ở dòng 3 và 4 có băng ADN tơng ứng ~ 690bp và 590 bp đợc cắt ra từ gen PRSVN. Kết quả cắt với enzim đúng nh trình tự gen qui định. Nh vậy cấu trúc pRSETA-PRSVN nhận đợc là chính xác. Plasmid pRSETA-PRSVN đợc biến nạp lại vào chủng E.coli BL21(DE3) để biểu hiện gen PRSVN.
ảnh 9: Sự biểu hiện gen PRSVNtrong E.coli bằng điện di protein tổng số trên gel acrylamide 12%(trái) và Western blotting(phải)
Dòng M: Protein marker 200; 118; 78; 47.1; 31.4; 25.5; 13.8; 8.3 kD
Dòng 1: Protein tổng số đối chứng âm tách từ chủng E.coli BL21(DE3)(mẫu 1) Dòng 2: Protein tổng số chứa đựng protein PRSVN của PRSV của Việt Nam tách từ chủng E. coli BL21(DE3).
Dòng 3: Protein tổng số đối chứng âm tách từ chủng E.coli BL21(DE3)(mẫu 2) Dòng 4: Protein tổng số chứa đựng protein CP của PRSV của Malaysia
tách từ chủng E. coli BL21(DE3).
Sau khi protein tổng số đợc cố định trên màng, lai với kháng thể và phát hiện bằng nhuộm BCIP/NBT , băng protein ~40kD đã xuất hiện trên dòng 2 mà không thấy xuất hiện trên dòng 1 và 3 là mẫu đối chứng âm. Băng protein này tơng ứng với băng protein CP của PRSV của Malaysia ở dòng 4. Điều này cho thấy rằng protein qui định bởi gen PRSVN của PRSV của Việt Nam đã đợc biểu hiện. Nh vậy gen PRSVN đã đợc đa vào pCAMBIA2300 có khả năng dịch mã sang protein bình thờng.
Phần 4