III. Công thức một số môi trường dinh dưỡng thông dụng:
b. Giai đoạn nitrat hoá:
2HNO2 + O2 2 HNO3 + Q
* Các bước tiến hành thí nghiệm:
- Pha môi trường Vinogratxki 2:
NaNO2 2 gam MgSO4.7H2O 0,3 gam
KH2PO4 0,5 gam Nước 1000ml
FeSO4 0,4 gam
- Phân phối môi trường vào ống nghiệm, mỗi ống nghiệm 3 - 5 ml môi trường.
- Khử trùng 1 atm trong 15 phút.
- Cho vào ống nghiệm một ít đất.
- Nuôi cấy ở 25 – 30oC trong thời gian từ 5 – 7 ngày.
* Phân tích kết quả:
- Xác định sự có mặt của NO3- : lấy 1 – 2 giọt dung dịch nuôi cấy cho vào bản xứ lõm. Thêm 1 – 2 giọt dung dịch diphenylamin vào. Nếu có mặt NO3- thì dịch thử sẽ có màu xanh lam.
- Làm tiêu bản nhuộm đơn, soi bằng vật kính dầu để quan sát vi khuẩn nitrat hoá: vi khuẩn nitrat hoá có hình que tròn, hình hạt đậu, hình trứng, hình quả lê... kích thước lớn hơn vi khuẩn nitrit hoá, đó là Nitrobacter, Nitrospira, Nitrococcus.
3. Quá trình phản nitrát hoá: * Các bước tiến hành thí nghiệm:
- Pha môi trường có thành phần như sau:
KNO3 2 gam MgSO4.7H2O 0,3 gam
KH2PO4 1 gam Nacitrat 5 gam
K2HPO4 1 gam Nước 1000ml
- Phân phối môi trường vào ống nghiệm, mỗi ống nghiệm 4 - 5 ml môi trường.
- Khử trùng 1 atm trong 15 phút.
- Cho vào ống nghiệm một ít đất.
- Nuôi cấy ở 30 – 35oC trong thời gian từ 5 – 6 ngày.
* Phân tích kết quả:
- Xác định sự tạo thành N2: trong quá trình nuôi cấy N2 không ngừng được tạo ra và tạo thành một lớp bọt khí trên bề mặt môi trường.
- Làm tiêu bản nhuộm đơn, soi bằng vật kính dầu để quan sát vi khuẩn phản nitrat hoá: vi khuẩn nitrat hoá là những tế bào hình que, Gram âm, thuộc giống
Pseudomonas.
II. Sự chuyển hoá các hợp chất hữu cơ không chứa N: