IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.1.1. Khảo sát bổ sung bước rửa lần 3 bằng axit focmic/MeOH/HjO
Các chất phân tích (FQs) được chiết khỏi nền mẫu tôm bằng đệm phốt phát 0.05M có pH=7,4, do vậy các FQs tổn tại chủ yêú dưới dạng anion (nhóm -C O O ). Khi nạp vào cột MAX, các FQs sẽ bị giữ lại trên cột tại các vị trí trao đổi anion mạnh mang điện tích dương (nhóm - N+R 3). Cùng với FQs, nhiều tạp chất trong mẫu như các protein có cấu trúc cổng kềnh, các muối và những chất tương tự FQs cũng được giữ lại trên cột chiết. Trong bưởc rửa lần 1, để loại bỏ các chất ảnh hưởng và khoá các chất phân tích lại trên cột người ta sử dụng dung dịch NH3 5%. Tiếp theo để loại bỏ các bazỏ (không phải ion) và các hợp chất trung hoà người ta sử dụng MeOH cho bước rửa lần 2. Để loại bỏ các chất ảnh hưởng có độ phân cực lớn hơn độ phân cực của các FQs, chúng tôi thêm một bước rửa thứ 3. Hệ dung môi dùng cho bước rửa này là hỗn hợp dung môi axit focmic (4% )/M e0H /H20 . Để tìm tỉ lệ tối ưu của M e0H /H 20 chúng tôi dùng hỗn hợp trên làm dung môi rửa giải và khảo sát sự phụ thuộc diện tích tín hiệu vào tỉ lệ M e0 H /H 20 (tỷ lệ này thay đổi tuqd 10 tới 80%). Qui trình khảo sát cụ thể được thực hiện như sau:
• Lấy 5g tôm + 10 ụl hỗn hợp chất chuẩn FQs 10 ppm + 30 ml đệm phốt phát tiến hành đổng thể hoá, lắc, li tâm và gạn dịch chiết.
• Rửa lần 2 (cố định): bằng 3ml MeOH
• Khảo sát bước rửa lần 3: hỗn hợp dung môi axit focmic (4% )/M e0H /H20
• Cô gần cạn dung dịch rửa giải và hoàn nguyên về ỉm L bằng dung môi phù hợp cho phân tích HPLC
• Bơm mẫu vào HPLC/FLD và xác định diện tích các tín hiệu FQs Kết quả được trình bày trong hình dưới đây:
Hình 9: Sự thay đổi diện íích tín hiệu theo tì lệ M e0H /H 20 trong dung môi rửa lẩn 3
Tỉ lệ M e0H /H 20 tối ưu là điểm có diên tích túi hiệu nhỏ nhất (chất phân tích không bị rửa giải). Từ đồ thị ta nhận thấy rằng diện tích tín hiệu bằng khổng tại điểm có tỉ lộ M e0H /H 20 =10/90 vì vậy chúng tôi chọn tỉ lệ này cho bước rửa cột lần 3.