Vì tính chất vật lý của Chlorophyll là không tan trong nước, tan trong cồn, acetone, DMSO nên chúng tôi lựa chọn 3 loại dung môi cho nghiên cứu này là aceton, methanol và ethanol.
Bảng 3.1. Hàm lượng Chlorophyll thu được khi chiết với các dung môi và nồng độ dung môi khác nhau (24h chiết)
Dung môi Nồng độ dung môi Hàm lượng Chlorophyll a (mg/g) Hàm lượng Chlorophyll tổng (mg/g) Acetone 60% 2,130 4,013 70% 2,191 4,367 80% 2,184 4,176 90% 2,155 4,182 Methanol 60% 2,062 3,806 70% 2,044 3,912 80% 2,136 4,129 90% 2,142 4,154 Ethanol 60% 2,052 3,899 70% 1,954 3,861 80% 2,036 4,098 90% 2,028 4,075
Theo bảng 3.1, hàm lượng Chlorophyll a tăng cùng với việc tăng nồng độ acetone và đạt giá trị cao nhất ở 70% acetone (2.130, 2.191, 2.184 và 2.155mg/g theo thứ tự). Khi nồng độ acetone tăng lên 90%, hàm lượng
Chlorophyll a thu được giảm còn 2,155mg/g. Đối với dung môi methanol, nồng độ Chlorophyll a tăng tỉ lệ thuận với việc tăng nồng độ của dung môi và đạt giá trị cao nhất ở nồng độ 90% methanol là 2.142 mg/g. So với dung môi methanol, khi dùng dung môi ethanol, nồng độ Chlorophyll a luôn đạt giá trị thấp hơn, hàm lượng Chlorophyll a cao nhất thu được ở tỷ lệ 60% ethanol là 2.052 mg/g, thấp hơn hẳn so với hàm lượng Chlorophyll a thu được khi sử đụng dung môi aceton.
Như vậy, căn cứ theo kết quả thu nhận được, hàm lượng Chlorophyll a và Chlorophyll tổng số cũng như tỉ lệ của chúng thay đổi theo loại dung môi và nồng độ dung môi sử dụng. Acetone là dung môi cho tổng lượng
Chlorophyll thu nhận được cao nhất với hàm lượng Chlorophyll a khá cao. Ethanol là dung môi cho hàm lượng Chlorophyll a thấp nhất. Theo một số nghiên cứu trước đây (Barrett & Jeffrey, 1964), enzyme Chlorophyllase vẫn còn giữ một phần hoạt tính ở các nồng độ dung môi khác nhau làm cho
Chlorophyll bị chuyển sang các dạng đồng phân khác. Mặt khác, sự hoạt động của Chlorophyll b reductase cũng tạo phản ứng chuyển Chlorophyll b thành
Chlorophyll a. Có thể chính hoạt động của hai enzme này trong quá trình tách chiết (giai đoạn phá vỡ tế bào, lưu trữ trong các loại dung môi ở các nồng độ khác nhau) đã dẫn đến sự khác biệt về hàm lượng Chlorophyll a thu nhận được. Các nghiên cứu về cấu tạo của Chlorophyll cho thấy sự khác nhau giữa
Chlorophyll a và Chlorophyll b là tại vị trí C7 ở Chlorophyll a là nhóm methyl (-CH3) còn ở Chlorophyll b là nhóm formyl (-CHO) (Woodward RB, 1960). Như đã biết, acetone có công thức phân tử là (CH3)2CO; trong khi đó, methanol (CH3OH) và ethanol (C2H5OH) là hai dung môi có chứa nhóm methyl, ethyl (-CH2) và nhóm hydroxyl (-OH) rất dễ dàng chuyển sang nhóm
formyl. Mặt khác, khả năng hòa tan của Chlorophyll khác nhau dựa trên loại và tỉ lệ dung môi khác nhau cũng dẫn đến sự khác biệt trong kết quả thí nghiệm (Bảng 3.1). Từ kết quả nghiên cứu trên, dung môi acetone với nồng độ 70% được lựa chọn làm dung môi tách chiết Chlorophyll a cho các nghiên cứu tiếp theo.