Quy trình tách cột
Quy trình này được thực hiện cho sản phẩm tách chiết và chuyển hóa từ 1 lần chiết Sohxlet (700g/l mẻ/l Sohxlet):
Chuẩn bị cột sắc ký: cho vào cột sắc ký thủy tinh (ϕ65 mm, khóa Teflon), một miếng bông nhỏ phía trên phần khóa, thêm một ít cát sạch (50- 70 mesh) phía trẻn phần bông, sau đó thêm từ từ 400g Silica gel (60Ǻ, 230- 400 mesh) vào trong cột, gõ nhẹ cột dể bột Silica gel ồn định. Từ từ thêm vào từ phía trên cột dung môi n-hexane, đồng thời mở khóa cột để dung môi chảy qua hết phần Silica gel trong cột và đi ra phía đầu cột. Gõ cột và để cột ổn định trong khoảng 15 phút.
Hòa tan hỗn hợp methyl pheophorbide a thô (25-30g) trong dichloromethane, sau dó dùng pipet pasteur hút và từ từ chuyển lên dầu cột, chú ý không làm bề mặt silica gel bị tác động, phân tán. Mở khóa cột để phần dung dịch chứa hỗn hợp methyl pheophorbide a chạy vào đầu cột.
= 1:1), tiến hành chạy cột cho đến khi dung dịch rửa giải không còn màu vàng đó (tổng thể tích hệ dung môi sử dụng khoảng 06 lit, có thể quay vòng hệ dung môi bằng cất quay chân không để tiết kiệm).
Sau đó chuyển dung môi rửa giải sang dichloromethane, tiếp tục tiến hành chạy cột, bỏ phân đoạn màu vàng đậm đi ra khỏi cột, sau đó đến phân đoạn màu xanh đen chứa sản phẩm Methyl pheophorbide a. Lấy phần dung dịch rửa giải này (khoảng 250 ml/l làn) vào các bình cầu 500 ml (1/2 bình), đánh số thứ tự. Kiểm tra sắc ký bản mỏng so sánh với chất mẫu methyl pheophorbide a. Gom các phân đoạn có sản phẩm tương đối sạch, cất loại dung môi dichloromethane, thu sản phẩm methyl pheophorbide a ở dạng rắn. Kết tinh lại trong hệ dung môi (dichloromethane: methanol 1,5: 10) thu được khoảng 3 g methyl pheophorbide a sạch (hiệu suất khoảng 0,43% theo khối lượng sinh khối tảo.
CHƯƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN