Quy trình chiết xuất và thu tủa từ hỗn dịch chiết tổng được thể hiện ở Hình 3.1
Hình 3.1. Sơ đồ quy trình chiết xuất và thu tủa từ dịch chiết tổng
5,0 kg dược liệu thân rễ Bảy lá một hoa Việt Nam khô sau khi xay nhỏ, được chiết nóng với EtOH 70% 3 lần, mỗi lần 3 h ở 80°C, tỉ lệ dược liệu/ dung môi là 1:6 (kg/l). Lọc loại bã dược liệu và gom dịch chiết thu hồi dung môi dưới áp suất giảm đến khi xuất hiện tủa. Ly lâm tách tủa và dịch. Phần tủa sau khi ly tâm làm khô bằng tủ sấy thu được 567,0 g. Phần dịch ly tâm được chiết phân bố lỏng – lỏng với dung môi n-butanol, chiết 3 lần, tỉ lệ 1:1 (tt/tt), gạn lớp lấy bên trên, gộp dịch gạn thu được phân đoạn n- butanol, cô loại n-butanol dưới áp suất giảm rồi làm khô trong tủ hút thu được 95,0 g
22
cao n-butanol. Phần dịch nước sau chiết lỏng – lỏng đem cô loại nước thu được 180,0 g cắn nước.
Sắc kí đồ các phân đoạn thô được chiết xuất từ thân rễ Bảy lá một hoa Việt Nam được thể hiện qua Hình 3.2.
A B
Hình 3.2. Sắc kí đồ các phân đoạn thô sau quá trình chiết xuất
Hệ dung môi ethyl acetat - methanol - nước (80:15:5, tt/tt/tt)
A: Quan sát ở UV 254 nm.
B: Quan sát ở ánh sáng thường sau khi nhúng dung dịch acid sulfuric 10% trong ethanol
(TT) rồi hơ nóng.
Phần tủa (567,0 g) sau khi lưu mẫu (12,0 g) được chia nhỏ thành 17 phân đoạn (1A-1R) bằng sắc ký cột silica gel pha thuận và rửa giải bằng dicloromethan (100%), ethyl acetat (100%), hệ dung môi dicloromethan - methanol (9:1, 7:3, tt/tt) và methanol (100%).
Phân tách phân đoạn 1M (20,0 g) bằng sắc ký cột silica gel với dung môi rửa giải dicloromethan - methanol (8:2 - 4:6, tt/tt) thu được 6 phân đoạn (3A-3F).
Phân đoạn 3E (5,0 g) được phân tách bằng sắc ký cột pha đảo, rửa giải bằng hệ dung môi aceton - nước (6:4, tt/tt) thu được 4 phân đoạn (5A-5D).
Tinh chế phân đoạn 5A (2,0 g) bằng sắc ký cột pha đảo với dung môi rửa giải aceton - nước (6:4, 7:3, tt/tt) thu được 40,0 mg hợp chất PV-5A3.
Hợp chất PV-8B2 (15,0 mg) thu được từ phân đoạn 5C (1,0 g) bằng sắc ký cột silica gel với hệ dung môi rửa giải là ethyl acetat - methanol - nước (85:10:5, tt/tt/tt).
23
Sắc ký đồ của các hợp chất phân lập so với cao tổng và tủa (ly tâm) được thể hiện qua Hình 3.3.
A B
Hình 3.3. Sắc ký đồ của các hợp chất phân lập
A: Sắc kí đồ pha thuận với hệ dung môi cloroform - ethyl acetat - methanol - nước
(6:38:11:10, tt/tt/tt/tt) sau khi nhúng dung dịch acid sulfuric 10% trong ethanol (TT) rồi hơ nóng.
B: Sắc kí đồ pha thuận với hệ dung môi aceton - nước (8:2, tt/tt) sau khi nhúng dung
dịch acid sulfuric 10% trong ethanol (TT) rồi hơ nóng.
E70: Dịch chiết tổng EtOH 70%;
Tủa: Kết tủa sau khi ly tâm khỏi dịch chiết cô đặc 8B2: Hợp chất PV-8B2;
5A3: Hợp chất PV-5A3.
Quy trình phân lập hai hợp chất PV-5A3 và PV-8B2 được thể hiện tóm tắt qua Hình 3.3.
24
Hình 3.4. Sơ đồ quy trình phân lập hai hợp chất PV-5A3 và PV-8B2
