CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.11. Xây dựng qui trình thu nhận sinh khối Bacillus subtilis
Dùng TCS + agar
T= 300C,
Cấy ria
Cấy chuyền trên môi trường thạch
Hoạt hóa giống
Bacillus subtilis
Giữ giống Bảo quản
Bảo quản ở tủ -200C
Thuyết minh quy trình công nghệ thu nhận sinh khối chủng Bacillus subtilis:
- Giống vi sinh vật: Bacillus subtilis được lấy từ phòng thí nghiệm vi sinh thuộc TTCNSTH. Chủng VSV này được bảo quản trên môi trường thạch nghiêng trong tủ lạnh ở nhiệt độ 50C. - Hoạt hóa : Nuôi chủng vi khuẩn Bacillus subtilis trong môi trường TCS ở 300C, tốc độ lắc 120v/ph trong 24h.
- Cấy chuyền :
+ Chuyền 0,1ml dịch VSV đã hoạt hóa nhỏ lên đĩa thạch chứa môi trường TCS + agar rồi dùng que trải dàn đều cho đến khi bề mặt môi trường se lại.
+ Đem nuôi cấy trong tủ ấm ở 300C trong 24h. TCS
T=300C, t=24h, pH 6, 120v/ph.
Tỷ lệ cấp giống là 10%
Môi trường thay thế,
T=300C, t=48h,
120v/ph, pH 6.0, tỷ lệ cấp giống 10%, tốc độ khuấy 150v/ph + dO2
Hình 3.2 Quy trình thu nhận sinh khối chủng Bacillus subtilis
Lựa chọn nguyên liệu tạo môi trường
nuôi cấy
Xây dựng môi trường nuôi cấy Tinh bột 5%. KNO3 0,5%. NaCl 3%.T=300C, pH 6 Tinh bột 5%, KNO3 0,5%, NaCl 3%, cao nấm men 60%, K2HPO4 25%. Nuôi cấy cấp 1
Nuôi cấy ở qui mô lớn
Sản phẩm sinh khối
+ Giữ giống: Cấy VSV từ đĩa thạch sang ống thạch nghiêng chứ môi trường TCS + agar. Nuôi cấy trong tủ ấm ở 300C trong 48h.
+ Bảo quản: Ở 50C trong 1 tháng, sau đó phải tiến hành cấy chuyền lại. - Nuôi cấy cấp 1:
+ Nuôi chủng VSV Bacillus subtilis trong môi trường TCS ở 300C, trong 24h, với tốc độ lắc là 120v/ph.
+ Sau 24h nuôi cấy nồng độ tế bào đạt 5,5.1010 (CFU/ml).
- Lựa chọn nguyên liệu tạo môi trường nuôi cấy: Khảo sát các nguồn dinh dưỡng cacbon (gồm rỉ đường, tinh bột, succarose, glucose, bột mì), nitơ (casein, pepton, KNO3, NaNO3, bã đậu nành, urê) và nguồn muối khoáng (NaCl). Sau đó, chọn ra các nguồn dinh dưỡng và xác định tỷ lệ thích hợp nhất của của nguồn cacbon, nitơ và muối khoáng nhằm tạo môi trường tăng sinh mới cho chủng Bacillus subtilis sinh trưởng phát triển.
- Nuôi cấy trên thiết bị lên men: Sau khi chuẩn bị giống và môi trường đầy đủ, chuyển tất cả vào thiết bị lên men. Chủng Bacillus subtilis được nuôi liên tục trong 48h trong môi trường có các thành phần dinh dưỡng thích hợp ở t=300C, pH=6, tốc độ khuấy 150v/ph + dO2, với tỷ lệ cấp giống là 10%. Nồng độ tế bào sau lên men đạt 5,0.1010 (CFU/ml).