Từ thân cây N. orientalis, chúng tôi đã điều chế ra các cao gồm: cao methanol (1 kg), cao n-hexane (6 g), cao ethyl acetate (80 g), cao chloroform (3.9 g) và cao nước (800 g) (Bảng 2.3). Tất cả các loại cao đều được thử hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH nhằm lựa chọn cao có phân đoạn có hoạt tính, làm cơ sở tiếp tục khảo sát thành phần hoạt chất của cây. Kết quả cho thấy, cao nước, cao n- hexan, cao chloroform và cao ethyl acetate đều có hoạt tính mạnh, trong đó cao nước có hoạt tính mạnh nhất. Tuy nhiên, kết quả chạy bản mỏng TLC của cao nước cho thấy có nhiều vết nên không thực hiện nghiên cứu phân lập chất trên cao này. Cao n-hexan, cao chloroform được kiểm tra định tính chứa nhiều alkaloid nên cũng không được lựa chọn nghiên cứu theo định hướng hoạt tính kháng oxy hóa. Vì vậy. chúng tôi lựa chọn cao ethyl acetate làm đối tượng để nghiên cứu phân lập các hoạt chất (bảng 3.3).
Từ caoethyl acetate, tiến hành chạy sắc ký cột với hệ dung môi CHCl3: MeOH thu được 6 phân đoạn. Kết quả thử hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH của các phân đoạn cho thấy phân đoạn C, D, E, F đều có hoạt tính, trong đó các phân đoạn D, E có hoạt tính mạnh hơn (bảng 3.4). Chúng tôi tiến hành phân lập chất trên tất cả cao phân đoạn nhằm mục đích tìm ra các hoạt chất và khảo sát thành phần hóa học của thân cây
N. orientalis- một loài cây thuốc chưa được nghiên cứu ở Việt Nam.
Bảng 3.3. Kết quả thử hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH của cao thô từ thân cây N. orientalis
Cao thô Phần trăm ức chế (%) IC50 (µg/µl)
10 µg/ml 5 µg/ml 2.5 µg/ml 1 µg/ml
Cao M ethanol 53.4 ± 0.9 27.1 ±1.2 8.9 ± 1.9 4.55 ± 1.7 9.3
Cao n-Hexane 98.9 ± 2.6 95.3± 2.1 81.6± 1.4 55.8± 1.2 6.6
Cao Chloroform (*) 99.9 ± 0.1 98.9± 1.9 84.8± 1.5 46.8± 1.4 11.3
Cao Ethyl acetate 93.18± 1.7 38.07± 1.2 40.52± 0.9 23.86± 0.3 6.1
Cao nước 99.98 ± 0.2 97.36± 1.4 67.36± 1.4 1.7
(*) Cao chloroform được thử nghiệm tại nồng độ 100, 50, 25 và 10 µg/ml
Bảng 3.4. Kết quả thử hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH của cao phân đoạn từ thân cây N. orientalis
Cao phân đoạn Phần trăm ức chế (%) IC50 (µg/µl)
10 µg/ml 5 µg/ml 2.5 µg/ml 1 µg/ml
GV-A(*) 10.4±2.4 >100
GV-B(*) 19.8± 1.5 11.3± 0.6 7.4± 0.5 1.7± 0.3 >100
36
GV-D 83.8± 1.2 46.6± 0.8 26.8± 0.8 5.3± 0.4 5.5
GV-E 98.8± 0.5 46.0± 1.2 15.1± 1.2 2.8± 0.3 5.4
GV-F 99.1 ± 0.3 91.5± 0.6 87.0± 1.2 44.2± 0.9 12.0
(*) Cao phân đoạn GV-A, GV-B, GV-C được thử nghiệm tại nồng độ 100, 50, 25 và 10 µg/m