Kết quả thử nghiệm hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH

6 hợp chất tinh khiết được phân lập từ thân cây N. orientalis (GV-1 đến GV-6) được thử nghiệm hoạt tính kháng oxy hóa bằng phương pháp ức chế gốc tự do DPPH (bảng 3.11).

Nhận xét:

Trong số 06 hợp chất tinh khiết được phân lập từ thân cây N. orientalis, 6 hợp chất (chiếm 100%) thể hiện có hoạt tính tại nồng độ 100 và 50 µM; 05 hợp chất (83.3 %) có hoạt tính ức chế tại nồng độ 25 và 10 µM. 3 hợp chất có hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH lớn hơn 50% tại nồng độ 10 µM tiếp tục được thử nghiệm tại các nồng độ thấp hơn là 5, 2.5 và 1 µM. Kết quả cho thấy, tất cả mẫu thử đều có hoạt tính tại các nồng độ nhỏ này.

Dựa vào kết quả giá trị IC50 nhận thấy, có 3 mẫu thử (chiếm 50 %) có hoạt tính với IC50 < 100 µM, trong đó có 1 hợp chất (chiếm 16.7 %) có IC50 trong khoảng 10-25

µM và 2 hợp chất (chiếm 33.3 %) có hoạt tính rất mạnh với IC50 < 10 µM. Hai hoạt chất GV-3 và GV-6 có hoạt tính mạnh và mạnh hơn cả chất đối chứng dương Trolox (IC50, 7.0 µM).

Bảng 3.11. Hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH của tất cả hợp chất đƣợc phân lập trên hai cây

Hợp chất Phần trăm ức chê (%) IC50 µM 100 µM 50 µM 25 µM 10 µM GV-1 7.21.2 4.581.4   >100 GV-2(*) 95.50.1 84.81.2 73.90.8 49.50.7 10.3 GV-3 (*) 63.50.5 49.60.7 38.71.2 33.31.4 5.1 GV-4 24.2± 1.3 18.9±2.4 8.4± 0.4 6.3± 0.7 >100 GV-5(*) 90.7± 1.5 85.7±1.6 20.3± 0.5 12.5±0.8 3.6 GV-6 15.2± 0.5 7.4± 0.8 3.8± 0.8 1.1± 0.9 >100

(*) Mẫu thử được thử nghiệm tại các nồng độ 10, 5, 2.5 và 1 µM.

Đánh giá

Hình 3.6. Cấu trúc của hợp chất GV-6 S copoletin

44

- Đối với các polyphenol đơn vòng: những hợp chất GV-1 với cấu trúc chứa 1 nhóm –OH trên vòng benzene, không có hoạt tính. Hai polyphenol đơn vòng còn lại là GV-2, GV-3 có hoạt tính ức chế mạnh. Xét về phương diện cấu trúc, chúng đều có các nhóm hydroxyl (–OH), đặc biệt là hai nhóm –OH ở vị trí orto với nhau. Hoạt tính sẽ phụ thuộc tỷ lệ thuận vào số lượng các nhóm –OH ở vị trí orto (GV-2 có 2 nhóm –OH, GV-3 có 3 nhóm –OH).

Đối với nhóm hợp chất coumarin, cũng nhận được kết quả tương tự. Các hợp chất GV-4, GV-6 không có hoạt tính do trong cấu trúc chứa 1 nhóm –OH hoặc không có nhóm –OH trên vòng bezene. Hợp chất GV-5 có hoạt tính rất mạnh do cấu trúc chứa 2 nhóm –OH ở vị trí orto với nhau trên vòng benzene.

Từ các so sánh và phân tích như trên, bước đầu chúng tôi đưa ra một số nhận định sau:

- Phương pháp ức chế gốc tự do DPPH tuân theo cơ chế cho proton (HAT), cho nên chỉ những hợp chất có khả năng mất proton thì mới thể hiện hoạt tính này.

- Chỉ những hợp chất có nhóm –OH của vòng benzene mới thể hiện hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH.

- Số lượng cặp –OH ở vị trí orto sẽ làm gia tăng hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH lên rất nhiều (từ không có thành mạnh và rất mạnh).

Để cũng cố thêm các nhân định trên, các mẫu có hoạt tính mạnh trên mô hình thử DPPH được thử nghiệm thêm bằng một phương pháp tuân theo cơ chế HAT nữa, đó là phương pháp ức chế quá trình peroxide hóa lipid (thử nghiệm MDA).