- Địa điểm: Nghiên cứu tiến hành tại 3 xã lần lƣợt thuộc danh sách vùng có sốt rét lƣu hành nặng, vừa và nhẹ của huyện Tuy Đức, tỉnh Đăk Nông Trong đó, cụ
2.8.3.Kỹ thuật phân tử RT-qPCR phát hiện loài và thể Plasmodium spp.
Những ngƣời mang KSTSR không biểu hiện triệu chứng có thể có mật độ < 1/µL máu. Phƣơng pháp qPCR siêu nhạy làm rõ tỷ lệ ngƣời không biểu hiện triệu chứng với mật độ trong máu thấp ở cộng đồng, với giới hạn phát hiện là 22 KSTSR/mL, cũng nhƣ trên các ca âm tính qua xét nghiệm KHV/test nhanh [23].
Nghiên cứu áp dụng phƣơng pháp cải tiến dựa trên phát hiện số bản sao RNA của gen RNA 18s, có thể xuất hiện lên tới 106 bản sao KST so với 5 bản sao của gen RNA 18s, điều mà chỉ đƣợc dùng ở các phƣơng pháp PCR hiện tại. Việc phát hiện các bản sao RNA ƣu điểm hơn là DNA để tăng độ nhạy hơn một bậc độ phóng đại mà không đòi hỏi thể tích máu tĩnh mạch lớn hơn, nên phƣơng pháp này sẽ đƣợc áp dụng trong nghiên cứu này. Cần 50µL máu từ đầu ngón tay đƣa vào ống eppendorf có chứa 250µL chất phản ứng RNA-protect (Qiagen) và
sau đó dùng cho việc trích xuất RNA với kit chẩn đoán Rneasy (Qiagen) theo quy trình của Wampfler và cộng sự [24].
Các mẫu dƣơng tính sẽ đƣợc xác định trong RT-qPCR “một bƣớc” [24], cho phép việc phát hiện 4 loài Plasmodium spp. trên ngƣời (P. falciparum, P. vivax, P. ovale và P. malariae), cùng với việc xác định chính xác loài KSTSR khi tiến hành ở những mẫu dƣơng tính với độ đặc hiệu theo phƣơng pháp RT- qPCR. Hơn nữa, trong các mẫu P. falciparum và P. vivax, nếu hiện diện giao bào trong mẫu P. falciparum và P. vivax qua phƣơng pháp RT-qPCR [24], phát hiện các bản sao đặc hiệu giao bào đối với lần lƣợt các gen Pfs25 hoặc Pvs25.