chế phẩm [6]
Nguyên tắc phương pháp pha loãng liên tục: Chuẩn bị lượng ống nghiệm tương ứng với nồng độ pha loãng đã được tính toán trước. Cho vào mỗi ống 9ml dung môi pha loãng, hấp tiệt trùng ở 115℃ trong 20 phút. Để nguội đến nhiệt độ phòng. Hút chính xác 1ml dung dịch cần pha loãng vào ống nghiệm thứ nhất được 10,00 ml có nồng độ pha loãng 10-1, tiếp tục pha loãng đến ống thứ n. Ta được nồng độ pha loãng 10-n.
- Xác định số lượng vi sinh vật trong nguyên liệu bột đông khô VSV
Cân chính xác 1,00g bột đông khô L. acidophilus, cho vào bình nón có chứa 100 ml nước cất đã được hấp tiệt trùng. Hoà tan hoàn toàn bằng khuấy từ ở tốc độ 500 vòng/ phút trong 5-10 phút cho đến khi bột tan hoàn toàn trong nước cất tạo thành
18
dung dịch đồng nhất. Hút chính xác 1,00ml dung dịch trên pha loãng liên tục đến nồng độ thích hợp. Hút chính xác 0,2ml dung dịch tại 3 nồng độ cuối cấy lên đĩa petri đã được tiệt trùng có môi trường MRS thạch tiệt trùng. Đặt trong tủ ấm 37℃, 5% CO2, sau 48-72h tiến hành đếm số lượng khuẩn lạc mọc trên mỗi đĩa. Mỗi nồng độ tiến hành với 2 đĩa petri.
- Xác định số lượng vi sinh vật trong chế phẩm giọt dầu
Lắc Vortex chế phẩm khoảng 10 giây cho đều, hút chính xác 1,00ml dịch chế phẩm đem pha loãng liên tục đến nồng độ thích hợp. Hút chính xác 0,2ml dung dịch tại 3 nồng độ cuối cấy lên đĩa petri đã được tiệt trùng có môi trường MRS thạch tiệt trùng. Đặt các đĩa vào tủ ấm 37℃, 5% CO2, sau 48-72h tiến hành đếm số lượng khuẩn lạc mọc trên mỗi đĩa. Mỗi nồng độ tiến hành với 2 đĩa petri.
- Phương pháp đếm
Sau thời gian nuôi cấy, mỗi tế bào sẽ mọc một khuẩn lạc, đếm số lượng khuẩn lạc, lấy giá trị trung bình trên 2 đĩa. Dựa vào giá trị trung bình nhân với nồng độ pha loãng ta suy ra số lượng tế vào có trong 1g cơ chất nghiên cứu.
Công thức tính số vi sinh vật trong 1,00ml hoặc 1,00g nguyên liệu: 𝑋 =𝐴𝑛. 10
𝑛 + 𝐴𝑛+1. 10𝑛+1 + 𝐴𝑛+2. 10𝑛+2 3. 𝑚. 𝑉
Trong đó:
X: số VSV có trong 1,00g hoặc 1,00ml nguyên liệu (CFU/g hoặc CFU/ml) An: số khuẩn lạc trung binh ở các đĩa cấy ở nồng độ được pha loãng 10n lần m: khối lượng mẫu cân để xác định số vi sinh vật
V: thể tích dịch cấy trải lên mỗi đĩa petri (ml) Lặp lại thí nghiệm 3 lần, lấy kết quả trung bình.
19
CHƯƠNG III. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN