30
Lựa chọn môi trường có khả năng phân tán đều L. acidophilus trong mẫu chế phẩm dạng hỗn dịch dầu khi sử dụng phương pháp pha loãng.
Tiến hành
Pha loãng chế phẩm tạo được theo công thức (11) trong các môi trường nước, nước và tween 80 (tỉ lệ thể tích 10:0,25), IPM tương tự như phương pháp pha loãng liên tục VSV ở mục 2.4 rồi đếm vi sinh vật cùng nồng độ pha loãng trên thạch sau 48-72h.
Mẫu chứng: đếm số vi sinh vật trong bột đông khô ban đầu với môi trường pha loãng là nước.
Kết quả
Kết quả của thí nghiệm được trình bày trong bảng 3.5.
Bảng 3.5. So sánh số khuẩn lạc khi pha loãng dầu tạo được ở các môi trường nước, nước+ tween 80, IPM với mẫu chứng ở nồng độ 10-3
Môi
trường pha loãng
Nước Nước +
tween 80 IPM Mẫu chứng
Lần thực nghiệm 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Số khuẩn lạc (CFU) 3 0 2 167 177 159 0 0 0 174 169 186 Trung bình số khuẩn lạc (CFU) 1,7 167,7 0 176,3
31
Hình 3.7. Hình ảnh khuẩn lạc (CFU) ở mẫu pha loãng bằng Tween 80 + nước và mẫu chứng
Nhận xét
- Không xác định được số VSV trong mẫu dạng dầu phân tán bột L. acidphilus khi tiến hành pha loãng bằng dung môi nước hoặc dung môi IPM.
- Có thể xác định số lượng VSV trong mẫu dạng dầu phân tán bột L. acidphilus bằng dung môi nước + tween 80 với tỉ lệ thể tích là 10:0,25.
- Các kết quả ở các lần làm thực nghiệm trong mỗi dung môi pha loãng gần giống nhau chứng tỏ thí nghiệm trên có độ lặp lại.
Bàn luận
Khi pha loãng dầu bằng nước, hai chất lỏng này có độ phân cực khác xa nhau nên khó hòa trộn vào nhau, nhanh chóng tách thành hai lớp chất lỏng, không kịp phân tán VSV vào nước pha loãng. Vì vậy, trong phần nước không có VSV còn phần dầu cấy trên thạch tạo các giọt, không thấm ướt trên thạch, hạn chế sự tiếp xúc của VSV với môi trường dinh dưỡng nên khó mọc.
IPM là một chất hoạt động bề mặt, thân dầu, không tan trong nước, khó thấm nước [41], vì vậy khi pha loãng dầu chứa VSV với IPM có thể phân tán được trong IPM nhưng khả năng thấm vào thạch kém (vì thạch pha từ nước) nên VSV không tiếp xúc được với môi trường dinh dưỡng.
32
Tween 80 (Polysorbat 80) là chất nhũ hóa thân nước, tăng tính thấm, có khả năng trộn hai chất lỏng thân dầu - thân nước với nhau tạo nhũ tương dầu trong