cấy vô trùng sang các bình nón 500 ml chứa 100ml các môi trường dung dịch khác nhau với tỷ lệ Vgiống:Vmôi trường=1:10. Các bình lên men lắc ở nhiệt độ 28 0,10C, tốc độ quay 140 vòng trên phút trong 120 giờ. Sau đó lọc hoặc li tâm rồi thử hoạt tính kháng sinh theo phương pháp giếng thạch.
Chọn chủng có khả năng lên men sinh tổng hợp kháng sinh tốt nhất: Các dạng chủng, biến chủng cần thử được nhân giống cấp 1 trên MT2dt, lên men trên môi trường tối thích cho sinh tổng hợp kháng sinh. Thử hoạt tính dịch lên men bằng phương pháp giếng thạch.
2.3.8. Phương pháp xác định độ bền nhiệt, bền pH của kháng sinh trong dịch lên men men
Xác định độ bền nhiệt: Lấy 3 ống dịch lọc dịch lên men, mỗi ống khoảng 5-7 ml. Một ống đun sôi trực tiếp 10 phút, một ống đun sôi cách thủy 30 phút, một ống để ở nhiệt độ thường. Đem thử hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp giếng thạch.
Xác định độ bền pH: Lấy 5 ống dịch lọc dịch lên men, mỗi ống khoảng 5 ml. Chỉnh pH dịch lên men trong ống về pH 3, 5, 7, 9, 11 bằng dung dịch NaOH 20% và HCl 25%. Thử hoạt tính dịch trong ống sau 1 ngày, và sau 5 ngày.
Xác định độ bền pH: Lấy 5 ống dịch lọc dịch lên men, mỗi ống khoảng 5 ml. Chỉnh pH dịch lên men trong ống về pH 3, 5, 7, 9, 11 bằng dung dịch NaOH 20% và HCl 25%. Thử hoạt tính dịch trong ống sau 1 ngày, và sau 5 ngày. bằng dung dịch NaOH 20% và HCl 25%. Dịch lọc và dung môi hữu cơ được cho vào bình gạn với tỷ lệ Vdung môi: Vdịch lọc= 1:5, lắc 1-3 phút, để phân lớp 1h sau đó gạn riêng lớp dung môi và lớp nước. Thử hoạt tính của lớp dung môi và lớp nước sau mỗi lần chiết bằng phương pháp khoanh giấy lọc. Có thể chiết một lần hoặc chiết lặp để chiết kiệt được KS trong dịch lọc.