Nguyên tắc: Chất kháng sinh khuếch tán vào môi trường dinh dưỡng đặc đã cấy VSV kiểm định, tạo các vùng ức chế VSV gọi là vòng vô khuẩn.
Tiến hành:
- Tạo hỗn dịch VSV: Lấy 1 vòng que cấy VSV kiểm định cấy vào 2,5 ml MT canh thang, để vào tủ 370C trong 18-24 giờ (đối với vi khuẩn).
- Cấy hỗn dịch VSV vào môi trường thạch thường đã tiệt khuẩn, để nguội tới 45-500C với tỷ lệ 2,5:100. Lắc đều, đổ vào các đĩa Petri vô trùng.
- Đưa mẫu thử vào môi trường kiểm định.
Có 3 phương pháp:
- Phương pháp khối thạch: Đặt các khối thạch Ф=6,0 mm có VSV sinh KS lên bề mặt thạch đã cấy VSV kiểm định.
- Phương pháp giếng thạch: Đục các giếng thạch trên môi trường đã cấy VSV kiểm định, nhỏ hơn 0,05 ml mẫu thử vào mỗi giếng thạch.
- Phương pháp khoanh giấy lọc: Đặt các khoanh giấy lọc đã được tẩm 3 lần dịch chiết DMHC lên bề mặt môi trường đã cấy VSV kiểm định.
Các hộp Petri có mẫu thử được ủ trong tủ ấm 370C khoảng 18-24h.
Đánh giá kết quả: Đo đường kính vòng vô khuẩn bằng thước kẹp Palmer độ chính xác 0,02 mm. Kết quả được tính theo công thức:
= s = Trong đó:
(mm): đường kính trung bình vòng vô khuẩn,
Di: Đường vòng vô khuẩn thứ i,
s: Độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh,
n: Số thí nghiệm làm song song (không có hướng dẫn khác thì n=3)
2.3.3. Phương pháp xác định môi trường nuôi cấy thích hợp
Trong tủ cấy vô trùng, Streptomyces 184.21 được cấy zigzac lên 5 môi trường MT1, MT2, MT5, MT6, MT7 trong hộp Petri, để vào tủ ấm 6 ngày. Sau đó thử hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp khối thạch. Dựa vào kết quả chọn ra MT cho hoạt tính kháng sinh cao nhất là môi trường nuỗi cấy thích hợp (MTth).