Phương pháp đột biến bằng ánh sáng UV

Một phần của tài liệu Nghiên cứu kháng sinh do streptomyces 184 21 tổng hợp (Trang 29 - 30)

 Pha hỗn dịch bào tử: Lấy 1 vòng que cấy bào tử Streptomyces 184.21 cho vào ống nghiệm chứa 10 ml nước cất vô trùng, lắc đều thu được hỗn dịch bào tử có độ pha loãng 10-1 (định ước). Sau đó pha loãng tiếp đến nồng độ 10-6 bằng nước vô trùng.

 Hút 0,1 ml hỗn dịch bào tử độ pha loảng 10-6, nhỏ vào hộp Petri có MTth, dàn đều bằng que chang vô trùng, để vào tủ ấm làm mẫu chứng.

 Đột biến bằng ánh sáng UV: 9 ml còn lại trong ống nồng độ 10-1 đổ ra đĩa Petri vô trùng. Chiếu ánh sáng UV (λ=254 nm) vào đĩa Petri có hỗn dịch bào tử nồng độ 10-1 đặt cách nguồn sáng 60 cm, trong thời gian 5 phút. Lấy ra để vào chỗ tối 2 giờ, rồi dùng pipet vô trùng pha loãng đến nồng độ 10-5.

 Phân tán bào tử sau đôt biến: Dùng pipet vô trùng hút 0,1 ml hỗn dịch bào tử sau đột biến ở các nồng độ 10-5, 10-4, nhỏ vào hộp Petri có MTth, dàn đều bằng que chang vô trùng rồi cho vào tủ ấm. sau 6 ngày, đếm số khuẩn lạc, xác định % độ sống sót theo công thức:

% độ sống sót = x 10-6+k x 100%

Nm: Số khuẩn lạc sau đột biến ở nồng độ 10-k. N0: Số khuẩn lạc sau mẫu chứng ở nồng độ 10-6.

 Tiến hành chọn lọc ngẫu nhiên các khuẩn lạc sau đột biến, cấy ra hộp Petri. Làm song song cả mẫu chứng. Sau 6 ngày để trong tủ ấm, thử hoạt tính kháng sinh. Tính % biến đổi hoạt tính theo công thức:

% biến đổi hoạt tính =

Di: Đường kính trung bình vòng vô khuẩn của biến chủng thứ i sau ĐB. D0: Đường kính trung bình vòng vô khuẩn của mẫu chứng.

 Sau đột biến, dựa vào kết quả thu được để lựa chọn ra các biến chủng có % biến đổi hoạt tính cao nhất dùng cho các nghiên cứu tiếp theo.

Một phần của tài liệu Nghiên cứu kháng sinh do streptomyces 184 21 tổng hợp (Trang 29 - 30)