- Chuẩn bị mẫu hạt bụng để phõn tớch HPLC: Hạt bụng của cỏc giống nghiờn cứu được tỏch loại vỏ, phần nhõn được nghiền thành bột đồng nhất bằng
Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phõn lập gossypol từ hạt bụng
3.1.3. Tinh chế gossypol bằng phương phỏp kết tinh
Gossypol dễ dàng bị ụxi hoỏ trong khụng khớ nờn nú thường được chuyển về dạng G-AA bền hơn. Sản phẩm G-AA khỏ bền, nú đó được chứng minh là vẫn đạt độ tinh khiết trờn 98% sau 30 năm bảo quản ở nhiệt độ -60C [22]. G-AA là phức hợp gồm 1 phõn tử của gossypol và 1 phõn tử acetic acid được liờn kết với nhau bởi liờn kết hydro. Kết tinh gossypol dưới dạng G-AA cũng là một phương phỏp thường được sử dụng khi phõn lập gossypol từ hạt bụng và một số sản
AA được phõn lập bằng phương phỏp kết tinh cho hiệu suất và độ tinh khiết cao mà khụng cần thụng qua phương phỏp sắc ký.
Phương phỏp tinh chế gossypol bằng phương phỏp sắc ký cột silica gel (Mục 3.1.2) là bước nghiờn cứu đầu tiờn giỳp chỳng tụi thu được sản phẩm gossypol tinh khiết, sử dụng làm chất đối chiếu cho cỏc nghiờn cứu về sau. Trong nghiờn cứu này, chỳng tụi nghiờn cứu phương phỏp kết tinh trực tiếp G- AA từ cao chiết DEE từ hạt bụng G. barbadense HD139 nhằm tỡm ra được điều kiện tinh chế gossypol đơn giản với hiệu suất cao.
Trong nghiờn cứu này, chỳng tụi khảo sỏt ảnh hưởng của nhiệt độ, thể tớch DEE và tỷ lệ acetic acid băng/DEE đến quỏ trỡnh kết tinh gossypol dưới dạng G- AA. Để chuẩn bị cho quỏ trỡnh trờn, chỳng tụi tiến hành chiết 3 kg bột hạt bụng theo phương phỏp được mụ tả trong mục 2.2.1, thu được 60 g cao DEE. Để đảm bảo sự đồng nhất của mẫu, cao chiết DEE từ 3 kg bột hạt bụng được hoà tan trong 3 lớt dung mụi CHCl3. Dung dịch này sau đú được chia đều thành 30 mẫu cú thể tớch bằng nhau. Cỏc mẫu sau khi thu hồi CHCl3 đến kiệt dưới ỏp suất giảm thu được cao chiết với khối lượng 2,0 ±0,1 g/mẫu tương ứng với khối lượng cao chiết từ 100 g bột hạt bụng. Cỏc mẫu cao này được sử dụng để nghiờn cứu quỏ trỡnh kết tinh.