- Tôm hùm xanh được bắt từ lồng nuôi mang về phòng thí nghiệm trong trạng thái còn sống.
- Gây mê
+ Tôm hùm còn sống nên rất khó lấy nội tạng vì thế cần phải gây mê tôm hùm trước khi lấy nội tạng.
+ Mục đích của việc gây mê nhằm làm cho con tôm bị tê liệt hoàn toàn tạo thuận lợi cho quá trình lấy nội tạng một cách dễ dàng và không làm ảnh hưởng đến enzyme. + Tiến hành gây mê bằng cách cho con tôm vào chậu nước đá đã chuẩn bị trước đó khoảng 30 giây đến 1 phút tùy theo thể trạng của con tôm cho đến khi con tôm vừa ngưng cử động là được. Gây mê Nghiền nhỏ Trích ly Ly tâm lần một Lấy nội tạng Kết tủa Ly tâm lần hai Tôm hùm Chế phẩm enzyme
GVHD: TS. ĐỖ VĂN NINH SVTH: TRẦN THỊ THANH HỒNG
Hình 3.2. Gây mê tôm
Hình 3.3. Tôm sau gây mê
- Lấy nội tạng
+ Tôm sau khi gây mê sẽ được lấy nội tạng.
+ Nội tạng ôm được lấy bằng cách dung kéo cắt lớp vỏ dọc theo đỉnh đầu rồi lấy hết phần nội tạng bên trong, sau đó dung kéo tiếp tục cắt lớp vỏ dọc sóng lưng rồi lấy phần ruột. Tránh để mũi kéo phạm vào phần nội tạng nhằm tránh thất thoát enzyme. Tất cả phần nội tạng vừa thu được gồm dạ dày, gan tụy và đường ruột được cho vào cốc rồi đem đi định lượng.
GVHD: TS. ĐỖ VĂN NINH SVTH: TRẦN THỊ THANH HỒNG
Hình 3.4. Lấy nội tạng tôm
Hình 3.5. Nội tạng tôm thu được
- Nghiền nhỏ
+ Nội tạng sau khi định lượng được cho vào cối đá (cối đá và chày nghiền phải được rửa sạch bằng nước cất và được làm lạnh bằng đá) và được nghiền nhỏ.
GVHD: TS. ĐỖ VĂN NINH SVTH: TRẦN THỊ THANH HỒNG
Hình 3.6. Nghiền nội tạng
- Trích ly
+ Nội tạng sau khi nghiền nhỏ được cho vào cốc thủy tinh sạch sau đó cho đệm Tris-HCl 0,05M; pH=7 vào cốc chứa nội tạng với tỉ lệ nội tạng : đệm là 1:7. Sau đó mang đi khuấy từ trong 60 phút nhằm trích ly tối đa lượng enzyme có trong nội tạng.
+ Lưu ý:
Đệm Tris-HCl trước khi bổ sung vào dịch nội tạng cần phải được làm lạnh.
Trong quá trình khuấy phải tạo điều kiện lạnh bằng cách cho cốc đựng nội tạng vào cốc thủy tinh lớn hơn có bỏ đá nhằm tránh làm ảnh hưởng của nhiệt độ đến enzyme.
GVHD: TS. ĐỖ VĂN NINH SVTH: TRẦN THỊ THANH HỒNG - Ly tâm lần 1
+ Dung dịch sau trích ly được cho vào các ống ly tâm với lượng giống nhau, sau đó tiến hành ly tâm trong 15 phút với tốc độ 6000v/p ở nhiệt độ 40C bằng máy ly tâm lạnh.
+ Ly tâm lần một nhằm loại bỏ cặn của nội tạng vì thế cuối quá trình ly tâm một sẽ lấy dịch và bỏ cặn.
- Kết tủa
+ Sau quá trình ly tâm một thu được dịch, ta tiến hành kết tủa enzyme bằng cách cho dung dịch cồn 960 vào các ống ly tâm với tỷ lệ dịch enzyme : dung dịch cồn 960 là 1:6, tiến hành kết tủa trong 60 phút.
+ Lưu ý:
Cồn trước khi cho vào dịch enzyme cũng phải được làm lạnh.
Trong quá trình kết tủa các ống ly tâm vào xô chứa đá nhằm tránh sự ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính enzyme.
Hình 3.8. Kết tủa dịch enzyme (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Ly tâm lần 2
+ Được tiến hành với điều kiện tương tự ly tâm lần một nhưng sau ly tâm sẽ tiến hành bỏ dịch và lấy tủa, tủa thu được chính là chế phẩm enzyme thô.
GVHD: TS. ĐỖ VĂN NINH SVTH: TRẦN THỊ THANH HỒNG
Hình 3.9. Tủa enzyme thu được sau ly tâm lần hai
- Chế phẩm enzyme thô sau khi thu được bảo quản trong tủ đông -200C nhằm giữ hoạt tính enzyme được nguyên vẹn nhất có thể.