NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.2. Phương pháp đánh giá hệ tự nhũ hĩa
a. Phương pháp đánh giá độ ổn định của các hệ chất mang:
Từ các hệ cĩ thể hình thành được (vi) nhũ tương, lấy các điểm với các tỉ lệ khác nhau. Quan sát sự biến đổi về thể chất, mức độ phân lớp, màu sắc của các hệ trong điều kiện phịng.
Hệ cĩ độ ổn định tốt nhất sẽ được lựa chọn cho các nghiên cứu tiếp theo.
b. Phương pháp đánh giá khả năng tự nhũ hĩa của các hệ chất mang:
Với các hệ cĩ độ ổn định tốt lấy từ kết quả đánh giá độ ổn định, tiến hành nhũ hĩa 0,2ml mỗi hệ vào 300ml nước ở 370C với 2 điều kiện: cĩ và khơng cĩ lực phân tán từ khuấy từ 10 – 20 vịng/ phút.
Quan sát khả năng tự (vi) nhũ hĩa. Hệ cĩ khả năng tự nhũ hĩa tốt nhất là hệ cĩ thời gian tạo thành (vi) nhũ tương nhanh nhất và khơng cần sử dụng lực khuấy. Và hệ này sẽ được sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo.
c. Phương pháp lựa chọn hệ tối ưu và tỉ lệ dược chất tối ưu đưa vào hệ
Trong các hệ cĩ khả năng tự nhũ hĩa tốt, tiến hành phối hợp dược chất vào 1,0g hệ theo các lượng khác nhau. Tiến hành nhũ hĩa tồn bộ hệ đã mang dược chất (1,0g hệ + dược chất) vào 300ml nước được duy trì nhiệt độ ở 370C và xác định KTTP TB của hệ.
Phối hợp dược chất từ 20 – 150mg cho 1,0g hỗn hợp trên. Theo dõi sự thay đổi về kích thước tiểu phân và độ ổn định dược chất khi dược chất được thêm vào hệ để lựa chọn tỷ lệ phối hợp dược chất phù hợp.
2.4.2. Phương pháp kiểm nghiệm, đánh giá
a. Phương pháp định lượng artesunat:
Xác định hàm lượng ART trong chất mang, hệ chất mang, (vi) nhũ tương bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao. Các điều kiện sắc kí được tham khảo từ IP 2003. Các bước tiến hành như sau:
Pha động: hỗn hợp đồng thể tích của acetonitril và dung dịch đệm phosphat pH 3,0
(hịa tan 1,36g KH2PO4 trong 1000ml nước, điều chỉnh tới pH 3,0 bằng acid phosphoric đặc). Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45µm.
Dung dịch chuẩn artesunat: dung dịch chuẩn ART trong hỗn hợp đồng thể tích
ethanol và acetonitril cĩ nồng độ chính xác khoảng 1mg/ml.
- Mẫu thử là artesunat trong chất mang/ hỗn hợp chất mang: cân chính xác một
lượng mẫu tương đương với 10mg ART, hồ tan bằng hỗn hợp đồng thể tích ethanol và acetonitril trong bình định mức 10ml. Lọc dung dịch qua màng 0,45µm.
- Mẫu thử là artesunat trong (vi) nhũ tương: Lấy chính xác 2,00ml (vi) nhũ tương, hịa tan hịa tan hồn tồn bằng ethanol trong bình định mức 10ml. Lọc dung dịch qua màng 0,45µm. Điều kiện sắc kí: Cột sắc kí: Agilent C18, 150mm x 4,6mm, 5µm. Bước sĩng phát hiện: 216nm Thể tích mẫu tiêm: 20µl Tốc độ dịng: 1ml/phút.
Tiến hành: lần lượt tiêm sắc kí dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Tính hàm lượng
artesunat trong mẫu thử dựa vào diện tích pic thu được của dung dịch thử, dung dịch chuẩn và nồng độ dung dịch chuẩn
b. Phương pháp đánh giá kích thước tiểu phân
Kích thước tiểu phân được xác định bằng máy đo kích thước tiểu phân Zetasizer.
c. Phương pháp đánh giá độ ổn định của hệ tự nhũ hĩa chứa artesunat và (vi) nhũ tương artesunat
Hệ tự nhũ hĩa chứa ART được bảo quản trong ống nghiệm thủy tinh cĩ nắp cao su kín, theo dõi độ ổn định ở điều kiện phịng và điều kiện lão hĩa 500C + 10C. (vi) nhũ tương sau khi bào chế được bảo quản trong lọ thủy tinh cĩ nắp cao su kín, theo dõi độ ổn định ở điều kiện phịng.
Độ ổn định vật lý được đánh giá qua thể chất của hệ sau các thời gian bảo quản khác nhau. Các tiêu chí đánh giá bao gồm: KTTP TB, sự phân lớp, biến đổi màu sắc.
Hàm lượng dược chất trong hệ sau thời gian bảo quản được xác định bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao.
CHƯƠNG 3