5. Tính mới của đề tài
3.2.3. Kết quả nghiên cứu tái sinh cây từ callus
Các callus hình thành trên môi trường NT7 được sử dụng để nuôi cấy trên các môi trường khác nhau để thăm dò khả năng tái sinh.
Sau 6 tuần nuôi cấy callus đã thu được các kết quả như sau:
Bảng 3.6Kết quả tái sinh chồi của callus cây hoa cúc sau 6 tuần nuôi cấy
Môi trường Tỉ lệ callus không tái sinh (%) Tỉ lệ callus tái sinh (%)
NT10 85,7 14,3 NT11 17,3 82,7 NT12 86,1 13,9 NT13 11,7 88,3 NT14 98,7 1,3 NT15 96,4 3,6 NT16 98,3 1,7 NT17 96,4 3,6 NT18 88,4 11,6 NT19 57,6 42,4 NT20 55,6 44,4 NT21 53,7 46,3 Ghi chú: NT10: MS + 1mg/l BAP NT11: MS + 2mg/l BAP NT12: MS + 1mg/l BAP + 0,2mg/l NAA NT13: MS + 2mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA NT14: MS + 1mg/l Kinetin NT15: MS + 2mg/l Kinetin NT16: MS + 1mg/l Kinetin + 0,2mg/l NAA NT17: MS+ 2mg/l Kinetin + 0,2 mg/l NAA NT18: MS + 1mg/l Kinetin + 0,5BAP NT19: MS + 2mg/l Kinetin + 0,5bAp NT20: MS + 1mg/l BAP + 0,5mg/l Kinetin
30
NT21: MS + 2mg/l BAP + 0,5 mg/l Kinetin
Các callus của hai giống cúc có phản ứng khác nhau khi được nuôi cấy trên môi trường MS có chứa các chất điều khiển khác nhau với nồng độ khác nhau. Các callus của cả hai giống hoa cúc phản ứng tương tự như nhau trên cùng một loại môi trường nuôi cấy. Trên môi trường chỉ có chứa BAP (1mg/l) thấp các callus có khả năng tái sinh thấp. Khi tăng nồng độ BAP lên 2mg/l trong môi trường tỉ lệ callus tái sinh tăng lên rõ rệt đạt hơn 80%.
Trên môi trường có chứa tổ hợp BAP và NAA cho thấy với nồng độ BAP thấp 1ml tỉ lệ tái sinh của các callus không khác biệt so với trên môi trường chứa 1mg/l BAP. Trên môi trường có 2mg/l BAP và bổ sung một lương nhỏ a-NAA đã thấy khả năng tái sinh của các callus rất lớn tương tự như trên môi trường NT11 tuy nhiên tỉ lệ chồi tái sinh trên môi trường này cao hơn trên môi trường chỉ có BAP.
Khi thay BAP bằng một hợp chất cytokinin khác là Kinetin với nồng độ tương đương thì thấy số lượng callus có khả năng tái sinh thấp. Trên tất cả các môi trường có chứa Kinetin và tổ hợp của kinetin và NAA số lượng các callus tái sinh rất thấp và số chồi tái sinh ở các callus rất nhỏ.
Trên môi trường kết hợp cả hai hợp chất BAP và Kinetin cho thấy khả năng tái sinh của callus hoa cúc đã tăng nhiều hơn so với môi trường có BAP ở nồng độ thấp và môi trường chỉ sử dụng riêng rẽ Kinetin hoặc kết hợp Kinetin và NAA.
Như vậy có thể nói rằng các callus của hoa cúc có phản ứng tái sinh tốt trên môi trường có chứa 2mg BAP/l. Khi kết hợp BAP và một lượng nhỏ (0,2mg/l) NAA thì có thể làm tăng thêm số chồi tái sinh/ callus.
Kết quả này được áp dụng để tái sinh cây từ callus các giống còn lại. Kết quả thu được tương tự như mẫu C01 và C03.
Tóm lại: môi trường tái sinh cây tốt nhất từ callus hoa cúc là MS + 30g/l sucrose +6,5g/l agar + 2mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA.
31
Hình 3.2Cây hoa cúc tái sinh từ callus