0
Tải bản đầy đủ (.pdf) (50 trang)

Về xây dựng đường chuẩn và đánh giá hiệu quả PCR

Một phần của tài liệu ĐƢỜNG THỊ HỒNG NHUNG NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA GLYCYL FUNTUMIN LÊN MỨC ĐỘ PHIÊN MÃ SURVIVIN TRÊN DÒNG TẾ BÀO BT474 VÀ A549 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ (Trang 42 -43 )

Đường biểu diễn chuẩn biểu thị mối tương quan giữa nồng độ/số bản sao của tác nhân đích ban đầu có trong mẫu chuẩn với giá trị chu kỳ ngưỡng Cp tương ứng. Từ đường biểu diễn chuẩn có thể tính được số bản copies ban đầu của gen survivin, so sánh mức độ phiên mã gen này ở ống thử so với ống chứng, từ đó đưa ra kết luận về tác dụng của thuốc.

Một phản ứng PCR đạt lý tưởng là phản ứng mà sau mỗi chu kỳ nhiệt cường độ huỳnh quang trong một ống phản ứng phải tăng gấp đôi, tức là hiệu quả khuếch đại lý tưởng E = 2. Vậy đường biểu diễn chuẩn lý tưởng phải có độ dốc -3,32 hay slope = - 3,32. Phản ứng PCR đạt lý tưởng với E = 2 tương ứng với E% = 100% tuy nhiên trong thực tế E% = 90%-105% là chấp nhận được. E% > 105% thường do pha loãng mẫu chưa chính xác từ nồng độ cao xuống nồng độ thấp mà đầu pipet còn dính mẫu làm cho nồng độ ở các mẫu có nồng độ thấp cao hơn dự kiến. Còn E% < 90% do pha loãng

mẫu từ nồng độ cao xuống nồng độ thấp không hút đủ mẫu làm cho các mẫu đó có nồng độ thấp hơn dự kiến.

Đối với kết quả xây dựng đường chuẩn trên hai dòng tế bào này, giá trị R2(BT474) = 0,8356 và R2(A549) = 0,9913 khá gần với 0,99 cho thấy thao tác pipetting đạt độ chính xác cao. Hiệu quả khuếch đại gen PCR E(BT474) = 2,561 và E(A549) = 4,882 cho thấy hiệu quả khuếch đại gen PCR tiến hành trên dòng tế bào ung thư vú BT474 chính xác hơn so với A549. Trong điều kiện thí nghiệm còn hạn chế, kết quả của nhóm nghiên cứu không tránh khỏi sai số, vì vậy chúng tôi kiến nghị nâng cao chất lượng thí nghiệm để tăng hiệu quả khuếch đại PCR trong những nghiên cứu tiếp theo.

Một phần của tài liệu ĐƢỜNG THỊ HỒNG NHUNG NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA GLYCYL FUNTUMIN LÊN MỨC ĐỘ PHIÊN MÃ SURVIVIN TRÊN DÒNG TẾ BÀO BT474 VÀ A549 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ (Trang 42 -43 )

×