Vì lượng ARN tổng số tách được ở các mẫu tế bào nghiên cứu không như nhau nên cần hiệu chỉnh lượng ARN tổng số đưa vào phản ứng sao cho không có sự khác biệt về nồng độ ARN giữa các mẫu nghiên cứu. Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng lượng ARN tổng số đầu vào là 500ng. Sau đó tiến hành phản ứng real-time RT- PCR theo quy trình ở phần 2.3.4. Phản ứng khuếch đại có thể quan sát được nhờ tín hiệu huỳnh quang của Taqman probe phát ra khi bám vào sợi ADN mạch kép từ khi phản ứng khuếch đại bắt đầu cho đến khi kết thúc thông qua một hệ thống camera theo dõi tín hiệu phát huỳnh quang từ mỗi ống.
Kết quả thu được là đường phản ứng Realtime RT-PCR và giá trị Chu kỳ ngưỡng CP của các mẫu thử và mẫu chứng cùng với mẫu đối chứng âm (nước). Dựa vào đường chuẩn đã xây dựng tính được số lượng bản sao gen survivin ban đầu có trong ống phản ứng.
Ngoài ra, có thể sử dụng kết quả Realtime RT-PCR để định lượng tương đối ảnh hưởng của hoạt chất lên gen nghiên cứu dựa trên đơn vị khối lượng. Từ đó có thể kết luận thuốc thử đã làm tăng hay giảm sự biểu hiện gen A đi bao nhiêu lần.
Tỷ lệ biểu hiện gen A [Thử/Chứng] được tính bằng công thức:
Hiệu quả khuếch đại PCR^(Chu kỳ ngƣỡng [C] –Chu kỳ ngƣỡng [T]) (*)
=>Tỷ lệ biểu hiện gen A [Chứng/Thử] được tính bằng công thức:
Hiệu quả khuếch đại PCR^(Chu kỳ ngƣỡng [T] –Chu kỳ ngƣỡng [C]) (**)
Với công thức (*)
Nếu Tỷ lệ biểu hiện gen A [Thử/Chứng] <1 thì thuốc thử đã làm giảm biểu hiện gen so với nhóm chứng.
Nếu Tỷ lệ biểu hiện gen A [Thử/Chứng] >1 thì thuốc thử đã làm tăng biểu hiện gen so với nhóm chứng.
2.2.7. Xử lý thống kê
Các kết quả của nghiên cứu được đưa vào xử lý Thống kê mô tả (Descriptive Statistic) và xử lý T-test (Two-samples Assuming Equal Variances) với α = 0,05 trên phần mềm MS Excel 2016.
CHƢƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN