Thực hiện phản ứng Realtime RT-PCR với các mẫu thử thuốc tại nồng độ GF 1,5 và 3,0 μg/ml và mẫu đối chứng trên hai dòng tế bào, thu được đồ thị như trong hình 3.4.
Hình 3.4. Đồ thị Realtime RT-PCR tại mức nồng độ 1,5 và 3,0 μg/ml
Nhận thấy, tín hiệu huỳnh quang ở tất cả các mẫu đều vượt ngưỡng phát hiện. Như vậy gen survivin biểu hiện ở tất cả các mẫu trong cả nhóm chứng và nhóm thử trên hai dòng tế bào tại hai mức nồng độ này.
Từ giá trị CP - chu kỳ ngưỡng của các mẫu tính ra số lượng bản copies ban đầu của gen survivin sau khi thử thuốc tại các mức nồng độ khác nhau dựa vào đường biểu diễn chuẩn đã xây dựng. Kết quả phân tích thống kê và so sánh tương đối phát hiện sự khác biệt giữa hai nhóm chứng và thử trên hai dòng tế bào được thể hiện trong bảng 3.3 và 3.4.
Bảng 3.3. Kết quả định lượng mức độ phiên mã gen survivin trên dòng tế bào BT474 tại mức nồng độ 1,5 và 3,0 μg/ml sau 24 giờ thử thuốc
BT474 1 2 3 Nồng độ mARN survivin
trung bình (ng/μl) p
ĐC 314,48 379,44 490,16 394,69 ± 88,83
AS 1.5 342,50 81,65 173,03 199,06 ± 108,07 >0,05 AS 3 533,84 231,29 223,52 329,54 ± 144,49 >0,05
Nhận xét: Đối với dòng tế bào BT474, sau khi thử thuốc tại hai mức nồng độ
1,5 và 3,0 μg/ml, kết quả cho thấy với p > 0,05 ở cả hai mức nồng độ không có sự khác biệt về lượng mARN survivin ban đầu giữa ống thử và ống chứng. Do đó có thể kết luận Glycyl funtumin tại hai mức nồng độ 1,5 và 3,0 μg/ml sau 24 giờ thử thuốc không ảnh hưởng tới mức độ phiên mã gen survivin đối trên dòng tế bào này.
Tiến hành tương tự với các mẫu trên dòng tế bào A549 tại mức nồng độ này thu được kết quả như bảng 3.4.
Bảng 3.4. Kết quả định lượng mức độ phiên mã gen survivin trên dòng tế bào A549
tại mức nồng độ 1,5 và 3,0 μg/ml sau 24 giờ thử thuốc
A549 1 2 3 Nồng độ mARN survivin
trung bình (ng/μl) p
ĐC 49,49 102,88 43,27 65,21 ± 32,77
AS 1.5 22,10 132,61 32,58 62,43 ± 49,81 >0,05 AS 3 27,24 43,92 10,63 27,26 ± 13,59 >0,05
Nhận xét: Đối với dòng tế bào A549, sau khi thử thuốc tại hai mức nồng độ 1,5
và 3,0 μg/ml, kết quả cho thấy với p > 0,05 ở cả hai mức nồng độ không có sự khác biệt về lượng mARN survivin ban đầu giữa ống thử và ống chứng. Do đó có thể kết luận Glycyl funtumin tại hai mức nồng độ 1,5 và 3,0 μg/ml sau 24 giờ thử thuốc không ảnh hưởng tới mức độ phiên mã gen survivin đối trên dòng tế bào này.