- Đặc điểm sinh thỏi rừng cõy lấy mẫu
3.2.1.Phương phỏp làm tiờu bản hiển
Mẫu dựng để cắt làm tiờu bản hiển vi với kớch thước thớch hợp chiều dài là 15 – 20 mm, chiều rộng bằng chiều dày thành tre, mẫu phải đảm bảo cú đủ cả ba mặt cắt (mặt cắt ngang, mặt cắt xuyờn tõm và mặt cắt tiếp tuyến). Trường hợp tiến hành làm nhiều mẫu cựng một lỳc thỡ nhất thiết phải đeo số hoặc đỏnh dấu cho từng mẫu trỏnh nhầm lẫn.
Xử lý làm mềm mẫu:
Mẫu sau khi được cắt xong cũn rất cứng, khụng thể cắt ngay làm tiờu bản được. Cần phải xử lý làm mềm để cú thể cắt dễ dàng hơn. Phương phỏp đơn giản phự hợp là cho mẫu vào luộc trong nước sụi tới khi mẫu thấu nước hoàn toàn (mẫu chỡm hẳn trong nước). Ở đõy yếu tố nhiệt độ gúp phần quan trọng trong quỏ trỡnh làm mềm mẫu. Khi mẫu đó thấu nước hoàn toàn, ta đưa mẫu vào hỗn hợp dung dịch hỗn hợp glyxerin – cồn (thớch hợp nhất là rượu metylic) pha theo tỷ lệ 1:1 ngõm một thời gian để làm mềm mẫu.
Cắt tiờu bản:
Để cú được cỏc lỏt cắt tốt (khụng bị rỏch hoặc vỡ) phải dựng lưỡi cắt thật sắc với cạnh cắt chuẩn. Ở đõy ta sử dụng dao lam loại tốt nhất để cắt. Mẫu được cầm chắc trờn tay, dựng dao cắt cỏc lỏt mỏng. Khi cắt, cỏnh tay phải duy trỡ chuyển động một cỏch liờn tục, ổn định cũn tay trỏi dựng chổi lụng mềm ộp nhẹ lỏt cắt lờn mặt dao để trỏnh cho lỏt cắt khỏi bị uốn cong và rỏch. Sau đú dựng chổi lụng để chuyển cỏc lỏt cắt vào ngõm trong cồn. Mỗi hành trỡnh của dao cho ta một lỏt cắt thớch hợp với chiều dày là 0,01 mm.
Nhuộm màu:
Cỏch thức chung để nhuộm màu cho tiờu bản được ghi theo cỏc bước dưới đõy:
2. Gạn hết Safranine rồi rửa cỏc lỏt cắt bằng cồn nhiều lần ở cỏc nồng độ khỏc nhau từ 25°, 50°, 75°, 80°, 90° cho đến 100° thỡ dừng lại.
3. Ngõm cỏc lỏt cắt trong dung dịch Xylen.
Dỏn tiờu bản (dỏn cỏc lỏt cắt trờn lam kớnh):
Dựng Bụm Canada để cố định cỏc lỏt cắt theo cỏch sau: Cỏc lỏt cắt (của mặt cắt ngang, mặt cắt xuyờn tõm và mặt cắt tiếp tuyến) sau khi đó ngõm trong Xylen sẽ được lấy ra và xếp cú trật tự lờn lam kớnh trong suốt (75 x 25 mm). Dựng 2 hoặc 3 giọt bột Bụm Canada hũa tan trong xylen để tạo ra một chất keo gắn dạng lỏng giống như đường – mật ở trạng thỏi núng chảy, sau đú đưa lờn để gắn cỏc lỏt cắt, rồi dựng một phiến kớnh cú kớch thước thớch hợp (40 x 20 mm) phủ lờn trờn.
Lưu ý: Xylen được xếp vào loại húa chất độc hại nờn phải cú cỏc biện phỏp phũng ngừa thớch hợp. Sau đú tiến hành làm núng nhẹ cho lam kớnh tới khi xuất hiện cỏc bọt khớ, và dựng lực để ộp hết phần keo gắn thừa. Tiờu bản cần khảo sỏt dựng để chụp ảnh nờn kết thỳc ở cụng đoạn này với việc dựng giẻ thấm xylen để lau sạch phần Bụm Canada tràn ra ngoài lam kớnh. [8]