L ỜI CẢM ƠN
2.6.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng của thể tích bảo quản đến hoạt lực và vận tốc tinh
trùng cá mú cọp
Từ kết quả thí nghiệm 1, 2, 3 cho thấy ES1-3, DMSO 15% và 1:3 lần lượt là chất bảo
quản, chất chống đông và tỷ lệ pha loãng tốt nhất. Vì vậy, thí nghiệm này sử dụng các thông
số trên để bảo quản tinh trùng cá mú cọp trong các dụng cụ bảo quản có thể tích khác nhau
gồm các cọng rạ 0,25 ml và 0,5 ml và ống bảo quản lạnh 1,5ml. Mỗi nghiệm thức thể tích được bảo quản ở 04 loại dụng cụ riêng biệt theo thể tích nói trên rồi tiến hành bảo quản theo phương pháp làm lạnh là đặt dụng cụ bảo quản ở (-76oC) thời gian 5 phút và sau đó đưa
thẳng xuống nitơ lỏng (-196oC). Sau 02 giờ tiến hành rã đông để quan sát hoạt lực tinh trùng
ở 03 dụng cụ bảo quản dưới kính hiển vi có kết nối camera. Mỗi cọng rạ hoặc ống bảo quản
lạnh được quan sát hoạt lực 03 lần. Từ kết quả quan sát sẽ cho biết ở thể tích nào tốt nhất để
tiến hành cho các thí nghiệm tiếp theo (thí nghiệm xác định quy trình bảo quản).
2.6.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng của quy trình làm lạnh đến hoạt lực và vận tốc tinh trùng cá mú cọp
Từ kết quả quan sát ở các thí nghiệm 1, 2, 3, 4 cho biết chất bảo quản, chất chống đông,
tỷ lệ pha loãng và thể tích bảo quản lần lượt là ES1-3, DMSO 15%, 1:3 và cọng rạ 0,25ml. Vì thế, các kết quả trên sẽ sử dụng trong thí nghiệm này và tinh trùng cá mú cọp được tiến hành bảo quản ở các quy trình làm lạnh khác nhau. Quy trình 1: nhúng trực tiếp các cọng rạ chứa
mẫu vào nitơ lỏng (-196oC). Quy trình 2 gồm 2 bước: tiến hành cho các cọng rạ xuống -76oC trong vòng 5 phút rồi cho xuống nitơ lỏng. Quy trình 3 gồm 3 bước: tiến hành hạ cho các
cọng rạ xuống -20oC sau 5 phút hạ nhiệt độ cọng rạ xuống -76oC thời gian 5 phút, cuối cùng
đưa các cọng rạ trực tiếp xuống nitơ lỏng để bảo quản. Mỗi quy trình làm lạnh được hút vào 04 cọng rạ riêng biệt rồi tiến hành bảo quản theo phương pháp làm lạnh được đề cập ở trên.
31
Sau thời gian bảo quản 5 tháng thì tiến hành rã đông để quan sát hoạt lực tinh trùng ở 03 cọng
rạ dưới kính hiển vi có kết nối camera. Mỗi cọng rạ được quan sát quan sát hoạt lực 03 lần.